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| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者vv120將贈送您 5 個金幣 | ||
[求助]
密度梯度離心無法分離純化蛋白怎么辦 已有1人參與
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密度分離液用的是60%的optiprep，hepes做稀釋液，梯度是15%，25%，35%，45%，手動制備，槍頭一滴一滴加，每層2.8ml，樣品600-1000 ul，制備密度梯度的時候肉眼可見分層，但最下面的分界線有些彌散，且液體自己會產(chǎn)生氣泡（查了資料說是hepes見光易氧化），離心6h，轉(zhuǎn)速41000r，每次離心后密度層分界線不清楚，按照加樣體積取密度液，wb驗證，發(fā)現(xiàn)各個密度層均有目的蛋白（文獻(xiàn)說只在28-31％這兩層）抗體是對抗，但之前其他實驗室進(jìn)行過這一步，用的抗體和這個一樣，能分離并且鑒定出來，所以想求職大家問問怎么回事 另外，文獻(xiàn)中的梯度是25-40％，每個梯度間隔為3％，我試過，但是打不出來分界線，，很容易就混到一起，也想問下這個，希望有相關(guān)方面的同學(xué)給我一些幫助，謝謝大家 @天使托 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2023-07-20 12:00:53
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