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實驗分析方法--硅膠基質(zhì)反相色譜固定相 已有1人參與
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反相高效液相色譜中使用的固定相大多是各種烴基硅烷的化學鍵合硅膠。烷基鏈長可以是C2、C4、C6、C8、C16、C18和C2等,最常用的是C18(又稱ODS),即十八烷基硅烷鍵合硅膠。鍵合烷基的鏈長對鍵合相的樣品負荷量、溶質(zhì)的容量因子及其選擇性有不同的影響,當烷基鍵合相表面濃度(mol/m2)相同時,隨著烷基鏈長增加,碳含量成比例增加,溶質(zhì)保留值增加。 199年, 某公司采用帶有二丁基或異丙基等較大基團的鹵代硅烷代替甲基鹵代烷進行表面硅烷化制備鍵合固定相,被稱作SB技術。由于位阻效應,較大的疏水基團從空間上起到了保護硅膠表面的作用,可明顯降低硅膠的水解作用,減少鍵合相的流失,固定相穩(wěn)定使用pH值上限達到9.0以上。SB技術解決了C8、CN和Ph固定相,特別是CN固定相的穩(wěn)定性問題。 有些硅烷鍵合相(如C8、C18)的生產(chǎn)廠家采用被稱為“封尾”( endcapping)的工藝,使硅膠擔體表面完全反應(硅烷化)。封尾包括鍵合固定相與小分子硅烷進行的后續(xù)反應,如三甲基氯硅烷、二甲基二氯硅烷或(不經(jīng)常的)六甲基二硅氮烷。這種方法通過反應掉一些殘余硅羥基,增加擔體的覆蓋率,以盡量減少與溶質(zhì)發(fā)生不良作用。然而,封尾也并不能完全克服酸性硅膠擔體的缺點,并且這些小分子的封尾基團在低pH值反相色譜的分離中極易從固定相上水解下來,使其在pH<3時抗干擾、耐用性不強,封尾的色譜柱在中等與高pH值(pH=6~9)時更穩(wěn)定。 改變鍵合基團的性質(zhì),如在烷基鍵合相中引入極性基團掩蔽殘留硅羥基,利用堿穩(wěn)定的金屬氧化物如ZrO2、TiO2、MgO等涂覆SiO2表面也能夠提高固定相的穩(wěn)定性,使其適用于更多的領域。此外,使用保護柱也可以對分析柱起到一定的保護作用。 作者：畢合生物 公眾號：畢合生物 畢合生物(www.bihebio.com)提供服務內(nèi)容：分子生物學、免疫, 重組蛋白及ELISA相關、活性小分子化合物、高端化學、材料化學、細胞資源庫與培養(yǎng)相關、生命科學、天然產(chǎn)物 |
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2樓2023-08-20 18:16:36
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