 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 442 | 回復(fù): 0 | |||
[交流]
正常視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)
|
|
實驗材料： 1. 材料來源：人眼、兔眼或者豬眼等； 2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，pH7. 3. 特殊取材器械：眼球托與7-0尼龍線。以滅菌的白色橡膠反口膠塞作為眼球托； 4. 消毒液：200IU/ml的慶大霉素生理鹽水； 5. 消化液：0.01%EDTA-0.125%胰蛋白酶的混合消化液； 6. 培養(yǎng)液：為含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液； 7. 培養(yǎng)器皿：培養(yǎng)瓶、24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿若干。 實驗方法： 1. 摘取眼球，用200IU/ml的慶大霉素生理鹽水浸泡消毒5min。沿鋸齒緣后2—3mm處環(huán)形剪開眼球前段，去除角膜、晶狀體以及玻璃體。分離去掉視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層。將眼球后段制成眼杯； 2. 將眼杯置于眼球托（可以洗凈消毒過的鹽水瓶膠塞替代）上，取持針器用7-0尼龍線在4個對稱方向上，把眼杯縫合固定在眼球托的壁緣上； 3. 用毛細(xì)吸管輕輕從眼杯中吸出視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層。以PBS液漂洗眼杯2次，吸干； 4. 加入0.01%EDTA-0.125%胰蛋白酶的混合消化液，置于無菌的燒杯中。于37℃恒溫箱中消化30min； 5. 吸去消化液。用PBS液稍洗。加入有血清培養(yǎng)液終止消化酶的作用，并用毛細(xì)吸管輕輕吹打眼杯內(nèi)壁，以使視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞脫落； 6. 收集眼杯內(nèi)的細(xì)胞懸液，離心（800r/min）8min； 7. 棄上清液，將沉淀的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞重新用培養(yǎng)液懸浮。計數(shù)； 8. 以8×104—10×104個/ml的密度接種于培養(yǎng)瓶中； 9. 送人培養(yǎng)箱中，按常規(guī)方法培養(yǎng)，每周換液2次； 10. 也可直接用機械分離植塊法：用無齒鑷撕下視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞層，經(jīng)PBS漂洗后，將其剪成1.5mm×1.5mm大小的組織塊，直接接種于24孔培養(yǎng)板進行培養(yǎng)。 作者：畢合生物 公眾號：畢合生物 畢合生物提供服務(wù)內(nèi)容：分子生物學(xué)、免疫, 重組蛋白及ELISA相關(guān)、活性小分子化合物、高端化學(xué)、材料化學(xué)、細(xì)胞資源庫與培養(yǎng)相關(guān)、生命科學(xué)、天然產(chǎn)物 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
材料328求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
085600材料與化工（高分子）290分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
325求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
320材料與化工，求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿314求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
347求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿西交大材料學(xué)碩 346 求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
304分材料專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
085601 材料305分求助
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 Sh畢合生物 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料328求調(diào)劑 +6 | 一個蘿卜02 2026-03-03 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 085601 材料305分求助 +4 | 泡泡郵件 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工，270求調(diào)劑 +12 | YXCT 2026-03-01 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | G212 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
[考研] 一志愿西工大材料學(xué)，英一數(shù)二總分321分，求調(diào)劑。 +3 | zz05zz 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +8 | yang婷 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境調(diào)劑 +8 | chenhanheng 2026-03-02 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0856材料工程，初試313調(diào)劑 +7 | 賣個關(guān)子吧 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +8 | 路lyh123 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +11 | February_Feb 2026-03-01 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料類考研調(diào)劑 +6 | gemmgemm 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +6 | wyyyqx 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化工335求調(diào)劑 +5 | 摸摸貓貓頭 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +7 | axyz3 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 【2026 碩士調(diào)劑】課題組 招收調(diào)劑生 +3 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290分材料工程085601求調(diào)劑 數(shù)二英一 +8 | llx0610 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 熬夜的貓頭鷹 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +6 | 愛擦汗的可樂冰 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +6 | 田智友 2026-02-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +9 | 材料專碩調(diào)劑； 2026-02-28 | 11/550 |
|