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流式熒光崔新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
抗體交聯(lián)上熒光后需要加BSA嗎？ 已有1人參與
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大家好，我是流式熒光崔工，一個(gè)旨在鏈接與流式熒光相關(guān)的朋友，一起賺錢(qián)、一起學(xué)習(xí)、一起工作、一起生活的靚仔。 前面的文章TCEP在抗體交聯(lián)中是如何還原抗體二硫鍵的？ 回答了一位老師提的問(wèn)題。 今天有一個(gè)讀者趙菲問(wèn)崔工： 我抗體交聯(lián)熒光后需要加BSA嗎？ 理解趙菲問(wèn)的這個(gè)問(wèn)題，我們先要理清一些概念和思路。 首先要弄清楚的就是BSA是什么？ — 1 — 那么什么是BSA呢？ BSA，中文叫牛血清白蛋白，是牛血清中的一種球蛋白， 包含607個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點(diǎn)為4.7。 BSA是一種使用廣泛的保護(hù)封閉試劑，在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用比較廣泛。 常用于免疫組織化學(xué) (IHC)、免疫細(xì)胞化學(xué) (ICC)、ELISA 以及蛋白質(zhì)印跡。 用于阻斷抗體的非特異性結(jié)合。 因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环�(wěn)定或活性低。 加入BSA后，它可能起到“保護(hù)”或“載體”作用。 大家應(yīng)該知道，很多抗體中都是加了BSA的，就是為了保護(hù)抗體。 說(shuō)到這，大家心中已經(jīng)有答案了吧。 答案就是抗體交聯(lián)熒光后是需要加BSA的。 — 2 — 既然要加，那如何加入？又加多少呢？ 這里又得先了解BSA得形態(tài)。 目前市面上商品化的BSA有兩種形態(tài)，一種是凍干粉，一種是液體。 如果是凍干粉的，那你根據(jù)你標(biāo)記好抗體的濃度，溶解BSA為你想要的濃度加入標(biāo)記好的抗體中就可以了。 如果是液體，那相對(duì)比較麻煩些，BSA如果是高濃度的，那又相對(duì)簡(jiǎn)單點(diǎn)，因?yàn)槟阆♂尦赡阆胍臐舛燃尤霕?biāo)記好的抗體中就可以了。 但如果你是低濃度的BSA，就會(huì)相對(duì)復(fù)雜點(diǎn)。 比如，你可能需要先用超濾管進(jìn)行濃縮，濃縮到一定濃度后加入標(biāo)記好的抗體中。 又比如你可能需要用透析的方法。 還可能用脫鹽柱的方法。 但如果你用透析的方法，最后可能還是需要用超濾管進(jìn)行濃縮，因?yàn)橥肝鰰?huì)稀釋你的樣本濃度。 最方便的崔工覺(jué)得還是用脫鹽柱的方法。 具體就是先用BSA去平衡脫鹽柱，讓脫鹽柱中留下BSA。 平衡好柱子后上標(biāo)記好的抗體樣本。 這樣用脫鹽柱處理后的熒光標(biāo)記抗體中不僅含了BSA，而且標(biāo)記好的抗體濃度不會(huì)有什么影響。 那具體加多少比較合適呢？ 為了保護(hù)蛋白,大家通常是加入0.1%-1%的BSA。 如果是進(jìn)行WB或其他免疫實(shí)驗(yàn)室，大家通常是加入1-5%的BSA會(huì)用于制備封閉液。 今天的文章就分享到這，如果今天的文章對(duì)您有一點(diǎn)點(diǎn)幫忙或一絲絲的啟發(fā)，歡迎幫忙點(diǎn)個(gè)在看和轉(zhuǎn)發(fā)，也可加崔工微信進(jìn)一步交流溝通。 |
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2樓2023-03-19 18:40:32
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