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[交流]
多糖提取純化檢測交流請教
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最近在提取分離植物里面的多糖，剛接觸，很多不明白的地方，請做過的指教指教啊。 1. 提取的粗多糖先用3kDa的透析膜去小分子，但是換了幾次水，透析了三天，得到的粗多糖顏色還是非常的深，請問這個顏色是什么物質(zhì)帶來的呢？我覺得多糖應(yīng)該不會帶顏色吧？ 2. 粗多糖采用苯酚硫酸法測糖含量，再用硫酸-間羥基聯(lián)苯法測酸性糖含量；這里苯酚-硫酸法測的糖含量是包括中性糖和酸性糖一起的總含量嗎？ 3. 在用DEAE分離中性糖和酸性糖的時候，用的55mm*350的柱子，上樣樣品20mg/mL，濃度再高就溶不了了，總的上樣量怎么算呢，比如能上幾百毫克？怎么上樣比較合適？分離得到了5個組分，但是SEC-RI測了后都不是對稱峰。DEAE分完后有大量的顏色洗脫不了，是小分子嗎？ 4. 再用Sephacry S200繼續(xù)分離，柱子26mm*60mm，這個Sephacry是中性糖和酸性糖都可以分離嗎？洗脫后收集80管，苯酚硫酸測后繪制洗脫曲線，怎么根據(jù)這個洗脫曲線合并餾分呢？因為合并的管子越少，組分應(yīng)該越純，但是丟的糖就多了。 5. 用DEAE和Sephacry分離后的回收率都很低，只有30%左右，其他的糖去哪里了呢？用高濃度的氯化鈉后面洗脫出來的濾液也測不到糖了。得到的酸性糖還是帶顏色的，為什么會有顏色呢？ 謝謝，有好多不懂的，實驗室之前也沒有人做過，搞的頭都大了  |
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chenhuanlong
禁蟲 (文學(xué)泰斗)
★
dengzelin520(金幣+1): 謝謝參與
dengzelin520(金幣+1): 謝謝參與
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
7樓2022-12-17 23:10:55
4樓2022-12-14 10:59:16
★
dengzelin520(金幣+1): 謝謝參與
dengzelin520(金幣+1): 謝謝參與
|
1、多糖尤其天然多糖很多是雜合的，帶顏色很正常，僅僅靠透析脫色不現(xiàn)實，要么靠層析和沉淀反復(fù)提純除去色素以及和色素鍵合的多糖，犧牲收率，要么就得化學(xué)脫色。 2、硫酸苯酚法包括中性糖和酸性糖，但是單位質(zhì)量酸性糖和中性糖顯色強度不同，所以首先得羥基聯(lián)苯法測出來糖醛酸而用此數(shù)據(jù)去配置相應(yīng)濃度的糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)液校正硫酸苯酚法的測定結(jié)果，還有就是硫酸苯酚法測定中性糖如果要準(zhǔn)確也不能用葡萄糖，而是要首先測定中性糖的組成糖，根據(jù)各單糖殘基的比例配置相應(yīng)對照品。 3、上兩量就是你上的糖總量啊，體積乘濃度，一個制備柱一個分析柱，測定結(jié)果不對稱峰很正常，取峰最主要部分反復(fù)純化才能得到單一對稱峰。 4、Sephacry S200屬于凝膠柱主要原理是分子量分離，用來分離中性糖和糖醛酸效果不好，DEAE可以。 5、回收率的計算如果是中性糖則應(yīng)該以糖的總量去計算，不能用物質(zhì)總量計算，同理糖醛酸也是。即測定樣品中總多糖含量，用純化后得到多糖量除以之前的多糖量。 |
10樓2023-01-09 21:23:00
11樓2023-01-15 13:47:31
簡單回復(fù)
jiaoxg12樓
2023-02-02 11:46
回復(fù)
dengzelin520(金幣+1): 謝謝參與
XG-WUST3樓
2022-12-13 22:04
回復(fù)
dengzelin520(金幣+1): 謝謝參與
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