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dengzelin520金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
多糖提取純化檢測(cè)交流請(qǐng)教
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最近在提取分離植物里面的多糖，剛接觸，很多不明白的地方，請(qǐng)做過(guò)的指教指教啊。 1. 提取的粗多糖先用3kDa的透析膜去小分子，但是換了幾次水，透析了三天，得到的粗多糖顏色還是非常的深，請(qǐng)問(wèn)這個(gè)顏色是什么物質(zhì)帶來(lái)的呢？我覺(jué)得多糖應(yīng)該不會(huì)帶顏色吧？ 2. 粗多糖采用苯酚硫酸法測(cè)糖含量，再用硫酸-間羥基聯(lián)苯法測(cè)酸性糖含量；這里苯酚-硫酸法測(cè)的糖含量是包括中性糖和酸性糖一起的總含量嗎？ 3. 在用DEAE分離中性糖和酸性糖的時(shí)候，用的55mm*350的柱子，上樣樣品20mg/mL，濃度再高就溶不了了，總的上樣量怎么算呢，比如能上幾百毫克？怎么上樣比較合適？分離得到了5個(gè)組分，但是SEC-RI測(cè)了后都不是對(duì)稱峰。DEAE分完后有大量的顏色洗脫不了，是小分子嗎？ 4. 再用Sephacry S200繼續(xù)分離，柱子26mm*60mm，這個(gè)Sephacry是中性糖和酸性糖都可以分離嗎？洗脫后收集80管，苯酚硫酸測(cè)后繪制洗脫曲線，怎么根據(jù)這個(gè)洗脫曲線合并餾分呢？因?yàn)楹喜⒌墓茏釉缴�，組分應(yīng)該越純，但是丟的糖就多了。 5. 用DEAE和Sephacry分離后的回收率都很低，只有30%左右，其他的糖去哪里了呢？用高濃度的氯化鈉后面洗脫出來(lái)的濾液也測(cè)不到糖了。得到的酸性糖還是帶顏色的，為什么會(huì)有顏色呢？ 謝謝，有好多不懂的，實(shí)驗(yàn)室之前也沒(méi)有人做過(guò)，搞的頭都大了  |
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dengzelin520(金幣+1): 謝謝參與
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1、多糖尤其天然多糖很多是雜合的，帶顏色很正常，僅僅靠透析脫色不現(xiàn)實(shí)，要么靠層析和沉淀反復(fù)提純除去色素以及和色素鍵合的多糖，犧牲收率，要么就得化學(xué)脫色。 2、硫酸苯酚法包括中性糖和酸性糖，但是單位質(zhì)量酸性糖和中性糖顯色強(qiáng)度不同，所以首先得羥基聯(lián)苯法測(cè)出來(lái)糖醛酸而用此數(shù)據(jù)去配置相應(yīng)濃度的糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)液校正硫酸苯酚法的測(cè)定結(jié)果，還有就是硫酸苯酚法測(cè)定中性糖如果要準(zhǔn)確也不能用葡萄糖，而是要首先測(cè)定中性糖的組成糖，根據(jù)各單糖殘基的比例配置相應(yīng)對(duì)照品。 3、上兩量就是你上的糖總量啊，體積乘濃度，一個(gè)制備柱一個(gè)分析柱，測(cè)定結(jié)果不對(duì)稱峰很正常，取峰最主要部分反復(fù)純化才能得到單一對(duì)稱峰。 4、Sephacry S200屬于凝膠柱主要原理是分子量分離，用來(lái)分離中性糖和糖醛酸效果不好，DEAE可以。 5、回收率的計(jì)算如果是中性糖則應(yīng)該以糖的總量去計(jì)算，不能用物質(zhì)總量計(jì)算，同理糖醛酸也是。即測(cè)定樣品中總多糖含量，用純化后得到多糖量除以之前的多糖量。 |
10樓2023-01-09 21:23:00
dengzelin520
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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4樓2022-12-14 10:59:16
chenhuanlong
禁蟲(chóng) (文學(xué)泰斗)
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dengzelin520(金幣+1): 謝謝參與
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7樓2022-12-17 23:10:55
從零_開(kāi)始
金蟲(chóng) (小有名氣)
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dengzelin520(金幣+1): 謝謝參與
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1、多糖有色素很正常的，可以在前處理上下一點(diǎn)功夫，尤其是葉片類可以用不同類型的有機(jī)溶劑（比如無(wú)水乙醇、石油醚）脫掉一部分再進(jìn)行提取。后期可以用大孔樹(shù)脂處理，藥用活性炭也可以試試，也有用過(guò)氧化氫的但是容易破壞多糖的抗氧化活性個(gè)人不太建議。 2、DEAE柱子上樣濃度太高了，一般來(lái)說(shuō)濃度低更容易分離的徹底，我個(gè)人通常用到5mg/mL，每次上樣20ml左右。這可能也是影響后面洗脫顏色重和回收率不高的一個(gè)原因，不對(duì)稱峰可能就是沒(méi)分離徹底 |
11樓2023-01-15 13:47:31
簡(jiǎn)單回復(fù)
jiaoxg12樓
2023-02-02 11:46
回復(fù)
dengzelin520(金幣+1): 謝謝參與
XG-WUST3樓
2022-12-13 22:04
回復(fù)
dengzelin520(金幣+1): 謝謝參與
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