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星星奧特曼新蟲 (初入文壇)
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[求助]
如何進(jìn)行油菜莖稈和葉片的ITS擴(kuò)增子自建庫？
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| 我使用試劑盒提取獲得了一批油菜莖稈和葉片的DNA，然后對他們進(jìn)行了16S擴(kuò)增子自建庫，目前送測結(jié)果良好。但I(xiàn)TS自建庫看卡了很久，主要原因有以下3點(diǎn)：1，我使用的ITS1區(qū)ITS1F和ITS2，理論上能夠排除寄主的污染，但是沒有辦法排除我的油菜干擾，電泳檢測到的亮帶基本都是油菜序列；2,ITS很難擴(kuò)（目前已經(jīng)將一輪提高到了35個(gè)循環(huán)），但還是很多擴(kuò)不出來，猜測可能跟DNA樣品質(zhì)量有關(guān)？3,擴(kuò)出來也很難和油菜序列分開，無法進(jìn)行切膠回收進(jìn)行下一步。球球幫幫孩子！是引物問題還是樣品問題？文獻(xiàn)查閱和前輩咨詢都無果！而且我覺得沒可能直接把DNA送給公司去測，太難了！@天使托 |
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