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【知識分享】抗體和蛋白的保存方法 已有2人參與
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1. 收到抗體后請務必在 12000rpm 離心 1-5 分鐘后再打開管蓋進行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul，請延長離心時間至 5 分鐘，以保證全部抗體均離心下來）！ 為了昂貴&珍貴的抗體，請看清是12000rpm 2. 對于大部分抗體，比較合適的保存方式是分裝后保存在-20℃或-80℃。 對絕大多數(shù)抗體來說，保存在-20℃是完全足夠了。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會有更多的好處！ 分裝可以最大程度的降低反復凍融對抗體活性的損害，同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。 分裝的量以一次實驗用完為好，最少不能少于 10ul每份。因為分裝體積越小，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。 復融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來！ 抗體工作液應該當天配制當天用完，在4℃盡量不要超過1天。 絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層，而不是門上。 3. 大部分抗體收到后 4℃短暫保存1-2周對抗體活性是沒有影響的。 如果抗體很快（1-2 周）會使用，推薦在4℃保存，這是為了避免反復凍融對抗體活性的損害。如果要長期保存則最好是在-20℃ or -80℃。最關鍵的一點是要根據(jù)說明書推薦的方式來正確的保存抗體！ 但是，腹水形式的產(chǎn)品請在收到后立即凍起來！因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長期在4℃保存會導致抗體的降解！ 4. 大部分抗體的運輸條件：一般的運輸過程需要1-2周的時間，所以是在4℃的條件下來完成的。4℃運輸最主要的目的是為了避免反復凍融對抗體活性的損害（如果使用干冰運輸，那么收到時抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程）。 所以運輸過程中絕對避免干冰運輸！ 特殊抗體的保存條件： 酶聯(lián)抗體：永遠保存在 4℃，避免凍起來。否則會導致酶活性的下降或者喪失。 偶聯(lián)抗體：所有偶聯(lián)抗體都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光4℃保存。尤其是熒光抗體，對光極為敏感，因此在所有的實驗階段也是要避光操作的！ IgG3 的同型對照：永遠保存在4℃，避免凍起來。因為如果出現(xiàn)凍融過程，該抗體非常容易形成多聚體（無論是保存還是運輸，絕對避免反復凍融），反復凍融會導致抗體變性，導致多聚體形成，從而降低抗體的結合能力！ 抗體保存其它相關信息： 關于加入甘油保存：有些人會加 50%的甘油到抗體中來避免反復凍融，甘油在-20℃會降低冰點。這對很多抗體可能是可行的。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存，因為這已經(jīng)超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體的話，請謹慎注意無菌操作，避免污染！ 關于蛋白保護劑： 蛋白在高濃度時更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），這就是為什么在抗體中加入 BSA 之類作為穩(wěn)定劑的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標記的話，則不能加入蛋白穩(wěn)定劑，因為這些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結合標記物。 關于疊氮化鈉（sodium azide）的使用：為了防止微生物污染，疊氮化鈉經(jīng)常被加入到抗體中（終濃度 0.02% (w/v)）。 在下述情況中不能使用疊氮化鈉： 如果抗體用于染色或處理活細胞，用于體內(nèi)研究： 疊氮化鈉在抵抗微生物的同時，對其它大部分有機物也是有毒的， 因為它阻斷了線粒體的 cytochrome electron transportsystem. 要偶聯(lián)帶有氨基基團的抗體：疊氮化鈉會干擾任何含有氨基基團的偶聯(lián)，因此在進行偶聯(lián)之前，應將疊氮化鈉去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化鈉保存，但是濃度只能是0.01％。對于需要偶聯(lián)的抗體，thimerosal (merthiolate)可以替代疊氮化鈉作為保護劑！ 注：疊氮化鈉的去除方式： 可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除！IgG 的分子量是 150kDa (IgM 是~ 600kDa); 疊氮化鈉的分子量只有65Da。使用 cut off 14kDa 的濾膜即可將疊氮化鈉從抗體中去除 |
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