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艾柏森_LB新蟲 (初入文壇)
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【知識(shí)分享】抗體和蛋白的保存方法 已有2人參與
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1. 收到抗體后請(qǐng)務(wù)必在 12000rpm 離心 1-5 分鐘后再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul，請(qǐng)延長(zhǎng)離心時(shí)間至 5 分鐘，以保證全部抗體均離心下來(lái)）！ 為了昂貴&珍貴的抗體，請(qǐng)看清是12000rpm 2. 對(duì)于大部分抗體，比較合適的保存方式是分裝后保存在-20℃或-80℃。 對(duì)絕大多數(shù)抗體來(lái)說(shuō)，保存在-20℃是完全足夠了。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會(huì)有更多的好處！ 分裝可以最大程度的降低反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害，同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。 分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好，最少不能少于 10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小，抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。 復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來(lái)！ 抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，在4℃盡量不要超過(guò)1天。 絕對(duì)避免將抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層，而不是門上。 3. 大部分抗體收到后 4℃短暫保存1-2周對(duì)抗體活性是沒有影響的。 如果抗體很快（1-2 周）會(huì)使用，推薦在4℃保存，這是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害。如果要長(zhǎng)期保存則最好是在-20℃ or -80℃。最關(guān)鍵的一點(diǎn)是要根據(jù)說(shuō)明書推薦的方式來(lái)正確的保存抗體！ 但是，腹水形式的產(chǎn)品請(qǐng)?jiān)谑盏胶罅⒓磧銎饋?lái)！因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長(zhǎng)期在4℃保存會(huì)導(dǎo)致抗體的降解！ 4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過(guò)程需要1-2周的時(shí)間，所以是在4℃的條件下來(lái)完成的。4℃運(yùn)輸最主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害（如果使用干冰運(yùn)輸，那么收到時(shí)抗體是凍起來(lái)的，為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過(guò)程）。 所以運(yùn)輸過(guò)程中絕對(duì)避免干冰運(yùn)輸！ 特殊抗體的保存條件： 酶聯(lián)抗體：永遠(yuǎn)保存在 4℃，避免凍起來(lái)。否則會(huì)導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失。 偶聯(lián)抗體：所有偶聯(lián)抗體都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光4℃保存。尤其是熒光抗體，對(duì)光極為敏感，因此在所有的實(shí)驗(yàn)階段也是要避光操作的！ IgG3 的同型對(duì)照：永遠(yuǎn)保存在4℃，避免凍起來(lái)。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過(guò)程，該抗體非常容易形成多聚體（無(wú)論是保存還是運(yùn)輸，絕對(duì)避免反復(fù)凍融），反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力！ 抗體保存其它相關(guān)信息： 關(guān)于加入甘油保存：有些人會(huì)加 50%的甘油到抗體中來(lái)避免反復(fù)凍融，甘油在-20℃會(huì)降低冰點(diǎn)。這對(duì)很多抗體可能是可行的。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存，因?yàn)檫@已經(jīng)超過(guò)了甘油的冰點(diǎn)。如果您要加入甘油來(lái)保存抗體的話，請(qǐng)謹(jǐn)慎注意無(wú)菌操作，避免污染！ 關(guān)于蛋白保護(hù)劑： 蛋白在高濃度時(shí)更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），這就是為什么在抗體中加入 BSA 之類作為穩(wěn)定劑的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來(lái)標(biāo)記的話，則不能加入蛋白穩(wěn)定劑，因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合標(biāo)記物。 關(guān)于疊氮化鈉（sodium azide）的使用：為了防止微生物污染，疊氮化鈉經(jīng)常被加入到抗體中（終濃度 0.02% (w/v)）。 在下述情況中不能使用疊氮化鈉： 如果抗體用于染色或處理活細(xì)胞，用于體內(nèi)研究： 疊氮化鈉在抵抗微生物的同時(shí)，對(duì)其它大部分有機(jī)物也是有毒的， 因?yàn)樗钄嗔司�粒體的 cytochrome electron transportsystem. 要偶聯(lián)帶有氨基基團(tuán)的抗體：疊氮化鈉會(huì)干擾任何含有氨基基團(tuán)的偶聯(lián)，因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前，應(yīng)將疊氮化鈉去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化鈉保存，但是濃度只能是0.01％。對(duì)于需要偶聯(lián)的抗體，thimerosal (merthiolate)可以替代疊氮化鈉作為保護(hù)劑！ 注：疊氮化鈉的去除方式： 可以通過(guò)凝膠電泳或過(guò)濾的方式去除！IgG 的分子量是 150kDa (IgM 是~ 600kDa); 疊氮化鈉的分子量只有65Da。使用 cut off 14kDa 的濾膜即可將疊氮化鈉從抗體中去除 |
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3樓2022-10-09 20:31:30
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