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血管形成實驗的步驟 已有1人參與
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我們將以小鼠動脈內(nèi)皮細胞為例,對細胞血管形成實驗進行簡單闡述。 細胞血管形成實驗操作步驟如下: 1. 基質(zhì)膠準備:實驗前一天將Matrigel置于冰盒中,放入4℃冰箱過夜,使膠能過夜緩慢融化。(注意:同樣要準備一些4℃預冷的槍頭用于吸取Matrigel); 2. 凝膠:第二天待matrigel凍融后,準備進行分裝,matrigel用預冷槍頭混勻,EP管提前預冷,每500uL分裝,在操作過程中要將Matrigel始終保持放在冰盒中; 3. 鋪膠:96孔板提前預冷,取50μL/孔Matrigel基質(zhì)膠加入96孔板中,加入時避免產(chǎn)生氣泡,置于細胞培養(yǎng)箱中60min待其凝固; 4. 收集細胞:加入1mL含EDTA的胰酶消化細胞,待消化完全后,加入含血清培養(yǎng)液終止消化,計數(shù)后用培養(yǎng)基重懸細胞并調(diào)整細胞密度為1-2×104個/mL; 5. 待膠凝固后,取出96孔板,每孔加入100μL細胞懸液,做好標記后放入細胞培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng); 6. 細胞常規(guī)培養(yǎng)2h至24h期間在鏡下觀察并拍照; 7. 結(jié)果分析:100X顯微鏡下隨機選取5個視野觀察計數(shù)血管內(nèi)皮細胞成管數(shù)量。成管率=實驗組成管數(shù)量/對照組成管數(shù)量*100%。 |
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2樓2022-10-31 22:42:36
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