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血管形成實(shí)驗(yàn)的步驟 已有1人參與
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我們將以小鼠動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞為例,對(duì)細(xì)胞血管形成實(shí)驗(yàn)進(jìn)行簡(jiǎn)單闡述。 細(xì)胞血管形成實(shí)驗(yàn)操作步驟如下: 1. 基質(zhì)膠準(zhǔn)備:實(shí)驗(yàn)前一天將Matrigel置于冰盒中,放入4℃冰箱過夜,使膠能過夜緩慢融化。(注意:同樣要準(zhǔn)備一些4℃預(yù)冷的槍頭用于吸取Matrigel); 2. 凝膠:第二天待matrigel凍融后,準(zhǔn)備進(jìn)行分裝,matrigel用預(yù)冷槍頭混勻,EP管提前預(yù)冷,每500uL分裝,在操作過程中要將Matrigel始終保持放在冰盒中; 3. 鋪膠:96孔板提前預(yù)冷,取50μL/孔Matrigel基質(zhì)膠加入96孔板中,加入時(shí)避免產(chǎn)生氣泡,置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中60min待其凝固; 4. 收集細(xì)胞:加入1mL含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,待消化完全后,加入含血清培養(yǎng)液終止消化,計(jì)數(shù)后用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞密度為1-2×104個(gè)/mL; 5. 待膠凝固后,取出96孔板,每孔加入100μL細(xì)胞懸液,做好標(biāo)記后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng); 6. 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)2h至24h期間在鏡下觀察并拍照; 7. 結(jié)果分析:100X顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野觀察計(jì)數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞成管數(shù)量。成管率=實(shí)驗(yàn)組成管數(shù)量/對(duì)照組成管數(shù)量*100%。 |
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2樓2022-10-31 22:42:36
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