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[求助]
大腸桿菌原核表達，菌液直接SDS-PAGE跑不出來條帶，求助 已有2人參與
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最近在做原核表達，大腸桿菌誘導后做SDS-PAGE，其中菌液直接跑膠上個月還能做出來，突然有一天跑不出來了，懷疑是自己操作問題。 但是超聲后的上清依然有目的蛋白表達，請問各位是什么原因？ 我的樣品處理是這樣的： 1 取誘導后菌液，8000g5min離心，棄上清，PBS重懸再8000g5min離心，棄上清； 2 沉淀用25%原體積的裂解buffer重懸后，+蛋白上樣buffer，95℃煮沸5min，12000g離心2min，取上清上樣 |
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2樓2022-08-17 20:05:06
3樓2022-08-17 20:06:40
高飛雄
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NineI
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8樓2022-08-25 16:03:38
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fuyuandj86: 金幣+10, 鼓勵交流 2022-09-10 13:35:29
fuyuandj86: 金幣+10, 鼓勵交流 2022-09-10 13:35:29
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我的方法可能有點問題，我跟你說一下吧，作為參考。 將培養(yǎng)后離心收集的沉淀用1/5體積的裂解液(LE buffer)重懸，和正常蛋白樣品處理方法一樣，菌液100ul+25ul蛋白上樣buffer，95℃煮10分鐘，12000離心1min，取上清上樣。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2022-08-29 17:06:38
NineI
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10樓2022-09-02 13:12:31
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