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EMSA!!! 已有5人參與
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最近做EMSA,EB染色后DNA片段一直看不到。想請教有經(jīng)驗的前輩一些問題。。。! 啟動子必須加探針標記嗎???很無知無助無力了。。我現(xiàn)在只用了純化后的啟動子片段跟蛋白孵育后跑Native-PAGE,用考馬斯染蛋白有正確條帶,很正常。 但是用EB染色20min紫外照膠卻看不到DNA條帶,不知道什么原因。是不是DNA濃度低,有沒有做相關的實驗,能否告知一下您的實驗條件參考一下,,不勝感激!。。! 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
專家顧問 (正式寫手)
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專家經(jīng)驗: +21 |
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(1) 探針的濃度夠嗎? (單獨跑探針染色能染上嗎) (2) 探針的大小(是否太大,沒有進入分離膠;是否太小,已經(jīng)跑出去了?) (3) 探針與蛋白結合的條件是否有利于結合(鎂離子是否必須,鹽離子濃度超過100mM了嗎? 緩沖液的pH值是多少?) (4) 在(3)的條件下,探針是否與蛋白結合(有實驗證據(jù)嗎) (5) 是否有可能存在探針被降解的可能? (6) 電泳過程是否大量產(chǎn)熱,是否導致蛋白變性,或者復合物解離? (7) 一步步做對照試驗吧,一個實驗不成功,很難說明哪(幾)個步驟有問題 good luck~ |

鐵蟲 (著名寫手)

金蟲 (正式寫手)
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