 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1598 | 回復(fù): 9 | ||||
ZMQ68新蟲 (初入文壇)
|
[交流]
EMSA!!! 已有5人參與
|
|
最近做EMSA，EB染色后DNA片段一直看不到。想請教有經(jīng)驗的前輩一些問題�。。。�！ 啟動子必須加探針標(biāo)記嗎？？？很無知無助無力了。。我現(xiàn)在只用了純化后的啟動子片段跟蛋白孵育后跑Native-PAGE，用考馬斯染蛋白有正確條帶，很正常。 但是用EB染色20min紫外照膠卻看不到DNA條帶，不知道什么原因。是不是DNA濃度低，有沒有做相關(guān)的實驗，能否告知一下您的實驗條件參考一下，，不勝感激�。。。。� 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有166人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
pennchem
專家顧問 (正式寫手)
-
專家經(jīng)驗: +21 - MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 297 (大學(xué)生)
- 金幣: 10458.5
- 散金: 65
- 紅花: 28
- 帖子: 596
- 在線: 1100.7小時
- 蟲號: 2139205
- 注冊: 2012-11-21
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
|
（1） 探針的濃度夠嗎？ （單獨(dú)跑探針染色能染上嗎） （2） 探針的大�。ㄊ欠裉�，沒有進(jìn)入分離膠；是否太小，已經(jīng)跑出去了？） （3） 探針與蛋白結(jié)合的條件是否有利于結(jié)合（鎂離子是否必須，鹽離子濃度超過100mM了嗎？ 緩沖液的pH值是多少？） （4） 在（3）的條件下，探針是否與蛋白結(jié)合（有實驗證據(jù)嗎） （5） 是否有可能存在探針被降解的可能？ （6） 電泳過程是否大量產(chǎn)熱，是否導(dǎo)致蛋白變性，或者復(fù)合物解離？ （7） 一步步做對照試驗吧，一個實驗不成功，很難說明哪(幾)個步驟有問題 good luck~ |
2樓2022-08-04 17:43:41
jinvijie
鐵蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2913.6
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 1075
- 在線: 148.2小時
- 蟲號: 23417065
- 注冊: 2020-08-24
- 性別: MM
- 專業(yè): 中藥抗炎與免疫藥理
3樓2022-08-05 00:24:08
xuxinH
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 63.5
- 帖子: 20
- 在線: 49分鐘
- 蟲號: 30262690
- 注冊: 2022-07-31
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2022-08-05 00:57:56
armigera
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 3429.6
- 散金: 15
- 紅花: 20
- 帖子: 756
- 在線: 113.5小時
- 蟲號: 1975949
- 注冊: 2012-09-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
5樓2022-08-05 05:29:10
ZMQ68
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 27.1
- 帖子: 33
- 在線: 2.7小時
- 蟲號: 30294561
- 注冊: 2022-08-03
- 專業(yè): 生物化學(xué)
6樓2022-08-05 15:59:17
ZMQ68
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 27.1
- 帖子: 33
- 在線: 2.7小時
- 蟲號: 30294561
- 注冊: 2022-08-03
- 專業(yè): 生物化學(xué)
|
謝謝回帖!! 1.用跑native-page膠制備的體系剩下的混合物跑了一次瓊脂糖凝膠電泳（DNA經(jīng)過比例稀釋），出現(xiàn)了很淺的一條帶。后續(xù)有重新進(jìn)行擴(kuò)增、產(chǎn)物純化鑒定，目前不確定不加標(biāo)記的探針我采取得濃度一系列操作下來染色是否可行。此外，在跑非變性膠做對照時，只有探針的膠孔染色也是看不見。 2.我采用的是連續(xù)體系，探針大小約250+bp或350bp，我單獨(dú)染蛋白位置大約在蛋白膠的1/3處，溴酚藍(lán)指示劑約在底部1/5處，按道理應(yīng)該沒有跑出去。電壓100V，約兩小時。 3.結(jié)合條件，參照文獻(xiàn)設(shè)定，實驗過程中沒有涉及到鎂離子，鹽濃度設(shè)置為50mM，緩沖液PH8。 4.參照文獻(xiàn)探針與蛋白應(yīng)該有結(jié)合，由于一直沒有染出DNA條帶，因此不確定是實驗方法問題，還是操作等問題。 5.DNA探針均為新制備，長時間可能會被降解，目前可能性較低。 6.電泳過程持續(xù)在4度下進(jìn)行，蛋白染色發(fā)現(xiàn)并沒有變性。7.非常感謝提出地注意事項!!!順便問一下DNA探針如果不標(biāo)記是否能做出來？標(biāo)記是必須的嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2022-08-05 16:13:41
ZMQ68
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 27.1
- 帖子: 33
- 在線: 2.7小時
- 蟲號: 30294561
- 注冊: 2022-08-03
- 專業(yè): 生物化學(xué)
8樓2022-08-05 16:14:50
armigera
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 3429.6
- 散金: 15
- 紅花: 20
- 帖子: 756
- 在線: 113.5小時
- 蟲號: 1975949
- 注冊: 2012-09-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
|
根據(jù)我曾經(jīng)的經(jīng)驗，自由探針(未結(jié)合蛋白)是大多數(shù), 結(jié)合的只是少數(shù)。所以你能看到總的dna并不能代表能看到結(jié)合的條帶。以上是我的推測，歡迎一起討論。 我之前用同位素標(biāo)記的，沒有做過未標(biāo)記直接染色的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2022-08-05 21:38:35
jinkairui123
鐵蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 35 (小學(xué)生)
- 金幣: 394.7
- 散金: 75
- 紅花: 2
- 帖子: 313
- 在線: 63.4小時
- 蟲號: 4843007
- 注冊: 2016-07-15
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
10樓2022-10-20 09:21:29
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 ZMQ68 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)105500藥學(xué)專碩，總分302求調(diào)劑 +3 | 五維天空 2026-03-04 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 江西師范大學(xué)王昆-盧章輝課題組招化學(xué)方向碩士研究生兩名 +3 | 哈哈大俠 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 267調(diào)劑求助 +5 | 聰少OZ 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué) 280 一志愿太原理工 求調(diào)劑 +8 | 拾玖壹 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿武漢理工大學(xué)-085602-總分296分-求調(diào)劑 +7 | 紫川葡柚 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +4 | xuyuan111 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 博斯特525 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +5 | 2103240126 2026-03-02 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 將未有期 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 331求調(diào)劑 +3 | zzZ&zZ 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
材料325求調(diào)劑
 30+5
|
mariusuki 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 266材料化工求調(diào)劑 +3 | 哇塞王帥 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大能動297求調(diào)劑，本科川大 +3 | 邵11 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
材料工程專碩283求調(diào)劑
5+8
|
，！？ 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料284求調(diào)劑，一志愿鄭州大學(xué)英一數(shù)二專碩 +15 | 想上岸的土撥鼠 2026-02-28 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 306分材料調(diào)劑 +5 | chuanzhu川燭 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)材料與化工325求調(diào)劑 +5 | 半截的詩0927 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[基金申請] 成果系統(tǒng)訪問量大，請一小時后再嘗試。---NSFC啥時候好哦，已經(jīng)兩天這樣了 +4 | NSFC2026我來了 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 想申博！ 2026-02-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 295復(fù)試調(diào)劑 +3 | 簡木ChuFront 2026-03-01 | 3/150 |
|