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虛謹(jǐn)清新蟲 (初入文壇)
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原核表達(dá)囊膜糖蛋白需要去除跨膜域，將跨膜域兩側(cè)序列連接時(shí)是否要加連接肽
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試驗(yàn)?zāi)康模涸吮磉_(dá)病毒囊膜糖蛋白，制備多抗 前期研究：這個(gè)病毒囊膜糖蛋白目前沒有別人做過表達(dá)的文獻(xiàn)可以參考，也沒有查到關(guān)于此蛋白結(jié)構(gòu)的分析，原計(jì)劃表達(dá)該蛋白全序列，但經(jīng)過多次試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)該蛋白要么不表達(dá)、要么表達(dá)量過低，不足以進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn) 現(xiàn)狀：對(duì)該蛋白序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該蛋白n端存在17aa的信號(hào)肽，c端存在兩個(gè)相鄰的跨膜域，計(jì)劃將前端信號(hào)肽和相鄰的2段跨膜域刪去后，將跨膜域前后的序列連到一起進(jìn)行表達(dá)。 蛋白總長(zhǎng)306aa，2段跨膜域在207aa-255aa 問題1：對(duì)于同一個(gè)蛋白，只是刪去中間跨膜區(qū)，要進(jìn)行表達(dá)時(shí)其前后段的序列之間是否需要添加連接肽？將添加和不添加連接肽的序列進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，以此來判斷是否添加，這樣分析可行嗎？ 問題2：如果添加連接肽，可以使用soe-pcr的方法對(duì)兩個(gè)片段進(jìn)行連接嗎？還是有更好的方法呢？@biostar2009@wizardfan |
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2樓2022-06-21 19:03:00
虛謹(jǐn)清
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3樓2022-06-21 19:47:36
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