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ZTianxmc新蟲 (初入文壇)
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求助!SDS-PAGE 已有3人參與
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為什么SDS-PAGE中同一蛋白質(zhì),加了沒加beta-巰基乙醇的會(huì)比加了beta-巰基乙醇的跑的更快呀,不是說SDS-PAGE蛋白質(zhì)遷移速率只和蛋白質(zhì)的分子量有關(guān)嗎 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
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影響蛋白電泳速率的因素有幾點(diǎn):蛋白分子量,蛋白帶電荷量,蛋白空間結(jié)構(gòu),以及電泳體系與凝膠濃度。 而SDS-PAGE之所以說蛋白質(zhì)電泳速率只和蛋白質(zhì)分子量有關(guān),是因?yàn)檎f的是變性還原性電泳,即loading buffer中含有DTT(或β-巰基乙醇)和SDS,只在這個(gè)情況下,才會(huì)只與分子量有關(guān)。 SDS攜帶負(fù)電荷,會(huì)與蛋白質(zhì)結(jié)合,大量的SDS攜帶的負(fù)電荷,使得蛋白本身攜帶的電荷影響忽略不計(jì),因此,排除了蛋白帶電荷量對(duì)電泳速率的影響。 同時(shí)SDS作為變性劑,會(huì)使得所有的蛋白都在結(jié)構(gòu)上呈現(xiàn)棒形,同時(shí)DTT(或β-巰基乙醇)作為還原劑,可以打開蛋白的二硫鍵,兩者共同作用,排除了不同蛋白的空間結(jié)構(gòu)對(duì)電泳速率的影響。 因此,最后只與蛋白分析量相關(guān)了,而你做了β-巰基乙醇是否添加的實(shí)驗(yàn),就是改變了這個(gè)條件,電泳速率肯定是會(huì)發(fā)生變化的 |
銅蟲 (正式寫手)
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