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NanoFCMlxq新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
細(xì)胞外囊泡單顆粒表征新技術(shù) 已有1人參與
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這一期我給你介紹一個(gè)單顆粒表征EV的新方法，就是納米流式檢測(cè)技術(shù)（NanoFCM）。這個(gè)技術(shù)是在傳統(tǒng)流式的快速、定量和多參數(shù)的基礎(chǔ)上，其靈敏度得到了一個(gè)質(zhì)的提升。要注意市面上有一些儀器也自稱(chēng)納米流式，其實(shí)是有本質(zhì)的區(qū)別的。我們這里說(shuō)的是廈門(mén)產(chǎn)的NanoFCM這款。 這款儀器是廈門(mén)大學(xué)顏曉梅教授團(tuán)隊(duì)從06年開(kāi)始研發(fā)的，目前已經(jīng)可以檢測(cè)到24nm的二氧化硅球，和7nm的金顆粒，對(duì)于絕大部分納米級(jí)別的顆粒的檢測(cè)都是沒(méi)有問(wèn)題的。它的原理是利用了瑞利散射和鞘流單分子熒光檢測(cè)技術(shù)。瑞利散射指的是當(dāng)待測(cè)顆粒非常小的時(shí)候，它的散射光和粒徑之間有一個(gè)6次方的關(guān)系，可以參考圖中這個(gè)公式。也就是說(shuō)粒徑從200nm到100nm，只縮小了一倍，但它的散射光是下降了64倍。同理，從200nm到25nm，其散射光是下降了26萬(wàn)多倍，顯然普通流式是沒(méi)辦法測(cè)到的。還有鞘流單分子熒光檢測(cè)，目前是可以測(cè)到單個(gè)藻紅蛋白也就是PE分子。 這個(gè)數(shù)據(jù)是已經(jīng)發(fā)表的，在不同平臺(tái)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)混合顆粒的效果[1]。這里是用了5種不同大小的二氧化硅球混合物，而且這5種球之間粒徑差距非常小，先是用透射電鏡花幾個(gè)小時(shí)時(shí)間進(jìn)行拍照統(tǒng)計(jì)之后得到5個(gè)峰，然后用納米流式，只需要2-3分鐘，就得到這個(gè)結(jié)果，也是5個(gè)峰，而且是收集了上萬(wàn)個(gè)顆粒的結(jié)果，更具有統(tǒng)計(jì)代表性。另外一個(gè)技術(shù)，DLS，得到的結(jié)果就很難分辨了。所以結(jié)果表明，納米流式不僅靈敏度高，而且分辨率也很高。 這是另一篇文章的數(shù)據(jù)，與第一代單顆粒表征技術(shù)NTA做了比較[2]。首先是均一的95nm二氧化硅球，納米流式得到的結(jié)果跟透射電鏡很接近，都是很細(xì)的峰，而NTA的結(jié)果就嚴(yán)重展寬，之前也講過(guò)，其實(shí)這跟NTA的原理有關(guān)。另外也是用混合顆粒做了驗(yàn)證，納米流式得到的結(jié)果同樣跟TEM很接近，都是5個(gè)峰，而NTA的結(jié)果就很難區(qū)分了。 另外，熒光靈敏度和分辨率也很高。帶有不同熒光強(qiáng)度的微球在儀器上可以明顯分群。而且可以測(cè)到單個(gè)PE分子，這個(gè)就很有意義了，因?yàn)槲覀冎繣V本身就很小，那它攜帶的蛋白就更小，所以需要更高的熒光靈敏度才能把少量的蛋白區(qū)分出來(lái)。 最后總結(jié)一下，這個(gè)技術(shù)厲害在哪？第一個(gè)，靈敏度很高，我們知道外泌體的粒徑在30-150nm之間，普通流式?jīng)]有辦法測(cè)到200nm以下，而納米流式呢，正好外泌體的這個(gè)粒徑范圍可以毫無(wú)壓力的檢測(cè)到。這個(gè)是散射靈敏度。另外熒光靈敏度也很高，可以測(cè)到單個(gè)PE分子，是真正做到單分子檢測(cè)。第二個(gè)，分辨率很高，前面數(shù)據(jù)也看到了，完全可以媲美電鏡的結(jié)果，而且省時(shí)省力，結(jié)果也有統(tǒng)計(jì)代表性。還有其他的一些優(yōu)勢(shì)，后面有機(jī)會(huì)可以再介紹，后面我會(huì)分享一些應(yīng)用的案例，有興趣可以關(guān)注我。 參考文獻(xiàn)： [1]Zhu, S; Ma, L; Wang, S; et al.Light-scattering detection below the level of single fluorescent molecules for high-resolution characterization of functional nanoparticles.[J].ACS Nano.2014,8(10):10998-1006 [2]Tian, Y; Ma, L; Gong, M; et al.Protein Profiling and Sizing of Extracellular Vesicles from Colorectal Cancer Patients via Flow Cytometry.[J].ACS Nano.2018,12(1):671-680 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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- 專(zhuān)業(yè): 細(xì)胞生物學(xué)研究中的新方法
2樓2022-02-14 14:30:57
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