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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 細胞科學 » 細胞外囊泡單顆粒表征新技術
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NanoFCMlxq新蟲 (正式寫手)
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細胞外囊泡單顆粒表征新技術 已有1人參與
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這一期我給你介紹一個單顆粒表征EV的新方法，就是納米流式檢測技術（NanoFCM）。這個技術是在傳統(tǒng)流式的快速、定量和多參數(shù)的基礎上，其靈敏度得到了一個質(zhì)的提升。要注意市面上有一些儀器也自稱納米流式，其實是有本質(zhì)的區(qū)別的。我們這里說的是廈門產(chǎn)的NanoFCM這款。 這款儀器是廈門大學顏曉梅教授團隊從06年開始研發(fā)的，目前已經(jīng)可以檢測到24nm的二氧化硅球，和7nm的金顆粒，對于絕大部分納米級別的顆粒的檢測都是沒有問題的。它的原理是利用了瑞利散射和鞘流單分子熒光檢測技術。瑞利散射指的是當待測顆粒非常小的時候，它的散射光和粒徑之間有一個6次方的關系，可以參考圖中這個公式。也就是說粒徑從200nm到100nm，只縮小了一倍，但它的散射光是下降了64倍。同理，從200nm到25nm，其散射光是下降了26萬多倍，顯然普通流式是沒辦法測到的。還有鞘流單分子熒光檢測，目前是可以測到單個藻紅蛋白也就是PE分子。 這個數(shù)據(jù)是已經(jīng)發(fā)表的，在不同平臺檢測標準混合顆粒的效果[1]。這里是用了5種不同大小的二氧化硅球混合物，而且這5種球之間粒徑差距非常小，先是用透射電鏡花幾個小時時間進行拍照統(tǒng)計之后得到5個峰，然后用納米流式，只需要2-3分鐘，就得到這個結(jié)果，也是5個峰，而且是收集了上萬個顆粒的結(jié)果，更具有統(tǒng)計代表性。另外一個技術，DLS，得到的結(jié)果就很難分辨了。所以結(jié)果表明，納米流式不僅靈敏度高，而且分辨率也很高。 這是另一篇文章的數(shù)據(jù)，與第一代單顆粒表征技術NTA做了比較[2]。首先是均一的95nm二氧化硅球，納米流式得到的結(jié)果跟透射電鏡很接近，都是很細的峰，而NTA的結(jié)果就嚴重展寬，之前也講過，其實這跟NTA的原理有關。另外也是用混合顆粒做了驗證，納米流式得到的結(jié)果同樣跟TEM很接近，都是5個峰，而NTA的結(jié)果就很難區(qū)分了。 另外，熒光靈敏度和分辨率也很高。帶有不同熒光強度的微球在儀器上可以明顯分群。而且可以測到單個PE分子，這個就很有意義了，因為我們知道EV本身就很小，那它攜帶的蛋白就更小，所以需要更高的熒光靈敏度才能把少量的蛋白區(qū)分出來。 最后總結(jié)一下，這個技術厲害在哪？第一個，靈敏度很高，我們知道外泌體的粒徑在30-150nm之間，普通流式?jīng)]有辦法測到200nm以下，而納米流式呢，正好外泌體的這個粒徑范圍可以毫無壓力的檢測到。這個是散射靈敏度。另外熒光靈敏度也很高，可以測到單個PE分子，是真正做到單分子檢測。第二個，分辨率很高，前面數(shù)據(jù)也看到了，完全可以媲美電鏡的結(jié)果，而且省時省力，結(jié)果也有統(tǒng)計代表性。還有其他的一些優(yōu)勢，后面有機會可以再介紹，后面我會分享一些應用的案例，有興趣可以關注我。 參考文獻： [1]Zhu, S; Ma, L; Wang, S; et al.Light-scattering detection below the level of single fluorescent molecules for high-resolution characterization of functional nanoparticles.[J].ACS Nano.2014,8(10):10998-1006 [2]Tian, Y; Ma, L; Gong, M; et al.Protein Profiling and Sizing of Extracellular Vesicles from Colorectal Cancer Patients via Flow Cytometry.[J].ACS Nano.2018,12(1):671-680 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2022-02-14 14:30:57
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