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pnpp法測脂肪酶活性
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1、ph=8的tris-hcl緩沖液的配制:6.05g tris 置于 1l 燒杯中,去離子水溶解,加入 0.1%阿拉伯樹膠粉(1g)、0.2%脫氧膽酸鈉(2g),配置成 50mmol/l ph 8.0 的tris‐hcl緩沖液。(溶液渾濁)不加脫氧膽酸鈉溶液澄清。 2、胰脂肪酶溶液:tris‐hcl 緩沖液溶解 0.25g 胰脂肪酶,混勻靜置,5 000r/min 離心 5min,取上清液,配成 1.2mg/ml 胰脂肪酶溶液(ppl),‐20℃保存。 3、底物溶液:4‐硝基苯棕櫚酸酯(pnpp)20mg 溶5ml異丙醇,再用 tris‐hcl 緩沖液定容到100ml。(溶液變渾濁)加入曲拉通-100,渾濁顯現(xiàn)未改變。 4、底物溶液:4‐硝基苯棕櫚酸酯(pnpp)2mg 溶10ml異丙醇。超聲15min,溶液變成澄清,加入酶液后,變渾濁。 想請教一下相關科研領域的大神們,有沒有做過相關實驗,渾濁是怎么回事,該怎么解決,pnpp法測脂肪酶活性實驗中要注意哪些細節(jié),(附件圖片是參考文獻操作)已經(jīng)試了好長時間了,急求幫助,謝謝! 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

新蟲 (初入文壇)
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是的,我的也是一直混濁,感覺像底物不溶于體系,實驗一直失敗,換了底物4-對硝基苯丁酸酯,現(xiàn)用現(xiàn)配,但是黃色會一直加深,吸光值一直變大,奧利司他根本測不出陽性對照 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
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