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懸浮培養(yǎng)

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從事細(xì)胞培養(yǎng)工作13年，現(xiàn)將細(xì)胞培養(yǎng)的經(jīng)歷與大家一起分享：
1.?貼壁細(xì)胞培養(yǎng)：
???從 hyclone應(yīng)用第一批商業(yè)化的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以前，很長一段時(shí)間病毒的擴(kuò)增是通過動(dòng)物組織來進(jìn)行規(guī)模化培養(yǎng)，局限性可想而知。自從哺乳動(dòng)物基礎(chǔ)培養(yǎng)開發(fā)出來，大量的動(dòng)物細(xì)胞被分離出來，對應(yīng)的個(gè)性化培養(yǎng)基也呼之欲出，逐漸不同的貼壁細(xì)胞對不同的病毒的敏感性也被發(fā)攪，如偽狂犬病毒適應(yīng)的細(xì)胞株有PK15、ST、IBRRS-2、BHK21、vero，藍(lán)耳病毒PRRSV適應(yīng)的細(xì)胞株有MA104、marc-145細(xì)胞、細(xì)小病毒適的細(xì)胞株有PK15、ST、IBRRS-2，圓環(huán)病毒PCV2適應(yīng)的細(xì)胞株有PK15等等。隨之對應(yīng)制備疫苗的用病毒擴(kuò)增也從組織轉(zhuǎn)至細(xì)胞上，成本、環(huán)保、安全、人道等方面有很大的進(jìn)步，而且病毒擴(kuò)增效率也得到了很大的提高。當(dāng)然這一時(shí)間主要處于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)階段，主要是用方瓶和轉(zhuǎn)瓶模式，這種模式需要大量的人力去消化細(xì)胞、搖洗細(xì)胞、分裝細(xì)胞、逐瓶接毒、逐瓶收獲、混批測毒、組批滅活，雖然看起來復(fù)雜，但相對組織培養(yǎng)病毒是絕對的一大進(jìn)步。
2.?載體懸浮培養(yǎng)：
???貼壁細(xì)胞在轉(zhuǎn)瓶中培養(yǎng)受貼壁面積的限制，細(xì)胞一般培養(yǎng)是單層，長多一點(diǎn)無非是更致密的單層，頂多也就2*10^6/cm2,對應(yīng)病毒增殖的所用到的細(xì)胞數(shù)量也會受到影響，以致出現(xiàn)病毒增殖瓶頸。
???這時(shí)候，人們會想到如何提高單位容積內(nèi)的表面積，果不出意料，球狀載體和片裝載體誕生了。球狀微載體代表廠家，進(jìn)口GE的cytodex1-3,目前使用最多仍屬cytodex1,國產(chǎn)完全替代品牌有上海啟為生物球狀微載體cyto1，使用效果基本與GE產(chǎn)品一致，價(jià)格也相對便宜，它的工作原理是，球狀載體是由一個(gè)高分子材料制成，溶于水后能放大，臌脹，形成有一定密度的微球水溶液，密度與水相近，略重，能很好的懸于培養(yǎng)基中，細(xì)胞所帶的電荷與微球正好相反，培養(yǎng)時(shí)能相互吸引最終達(dá)到貼附生長的效果。1克球狀微載體大致4400平方厘米，相當(dāng)于19個(gè)T225方瓶，培養(yǎng)病毒時(shí)高密度細(xì)胞有利于病毒更好的增殖，通常培養(yǎng)滴度能提高1-2個(gè)滴度。
另一個(gè)片狀微體叫酯片載體，目前國內(nèi)使用最多的是武漢塞科成的產(chǎn)品，能達(dá)到1克/1300平方厘米，它的優(yōu)勢在于懸浮培養(yǎng)時(shí)，不像球狀微載體一樣需要沉降換液，直接進(jìn)行灌注培養(yǎng)，時(shí)刻有新的培養(yǎng)基補(bǔ)充營養(yǎng)，另個(gè)一個(gè)優(yōu)勢是在做流感類疫苗，接毒前通常要洗去細(xì)胞中殘留的血清，片狀載體可以抽去老培養(yǎng)基，直接加PBS進(jìn)行洗數(shù)次即可。缺點(diǎn)是細(xì)胞生長狀態(tài)不易觀察，通常通過糖耗速度來觀察細(xì)胞生長長勢，而微載體可以直接放倒置顯微鏡下觀察生長狀態(tài)。片狀載體對病毒滴度的提升僅0.5-1個(gè)滴度左右。
3.?純懸浮培養(yǎng)：
??培養(yǎng)基不斷更新迭代，用戶對培養(yǎng)基中不含動(dòng)物源成份的需求越來越強(qiáng)，逐漸出現(xiàn)了無血清培養(yǎng)，純懸浮培養(yǎng)細(xì)胞逐漸被馴化出來，目前我所用到的純懸浮細(xì)胞有：BHK21、VERO、sf9、highfive、PK15、ST、HEK293A、HEK293F、MDCK等等，最大規(guī)模懸浮培養(yǎng)達(dá)到3000L。
培養(yǎng)成本僅貼壁細(xì)胞1/10。
?
總的來說，細(xì)胞培養(yǎng)的升級其實(shí)是培養(yǎng)基更新迭代的產(chǎn)物，兩者相互成就。

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武漢科技大學(xué)周志輝教授團(tuán)隊(duì)招師資博后（膜分離方向） +1/1

1樓 2021-11-11 14:45:20

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14樓2021-11-21 22:29:18

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6號楓木塔2樓

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