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懸浮培養(yǎng)

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細(xì)胞培養(yǎng)歷程
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從事細(xì)胞培養(yǎng)工作13年,現(xiàn)將細(xì)胞培養(yǎng)的經(jīng)歷與大家一起分享:
1.?貼壁細(xì)胞培養(yǎng):
???從 hyclone應(yīng)用第一批商業(yè)化的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以前,很長一段時間病毒的擴增是通過動物組織來進(jìn)行規(guī)模化培養(yǎng),局限性可想而知。自從哺乳動物基礎(chǔ)培養(yǎng)開發(fā)出來,大量的動物細(xì)胞被分離出來,對應(yīng)的個性化培養(yǎng)基也呼之欲出,逐漸不同的貼壁細(xì)胞對不同的病毒的敏感性也被發(fā)攪,如偽狂犬病毒適應(yīng)的細(xì)胞株有PK15、ST、IBRRS-2、BHK21、vero,藍(lán)耳病毒PRRSV適應(yīng)的細(xì)胞株有MA104、marc-145細(xì)胞、細(xì)小病毒適的細(xì)胞株有PK15、ST、IBRRS-2,圓環(huán)病毒PCV2適應(yīng)的細(xì)胞株有PK15等等。隨之對應(yīng)制備疫苗的用病毒擴增也從組織轉(zhuǎn)至細(xì)胞上,成本、環(huán)保、安全、人道等方面有很大的進(jìn)步,而且病毒擴增效率也得到了很大的提高。當(dāng)然這一時間主要處于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)階段,主要是用方瓶和轉(zhuǎn)瓶模式,這種模式需要大量的人力去消化細(xì)胞、搖洗細(xì)胞、分裝細(xì)胞、逐瓶接毒、逐瓶收獲、混批測毒、組批滅活,雖然看起來復(fù)雜,但相對組織培養(yǎng)病毒是絕對的一大進(jìn)步。
2.?載體懸浮培養(yǎng):
???貼壁細(xì)胞在轉(zhuǎn)瓶中培養(yǎng)受貼壁面積的限制,細(xì)胞一般培養(yǎng)是單層,長多一點無非是更致密的單層,頂多也就2*10^6/cm2,對應(yīng)病毒增殖的所用到的細(xì)胞數(shù)量也會受到影響,以致出現(xiàn)病毒增殖瓶頸。
???這時候,人們會想到如何提高單位容積內(nèi)的表面積,果不出意料,球狀載體和片裝載體誕生了。球狀微載體代表廠家,進(jìn)口GE的cytodex1-3,目前使用最多仍屬cytodex1,國產(chǎn)完全替代品牌有上海啟為生物球狀微載體cyto1,使用效果基本與GE產(chǎn)品一致,價格也相對便宜,它的工作原理是,球狀載體是由一個高分子材料制成,溶于水后能放大,臌脹,形成有一定密度的微球水溶液,密度與水相近,略重,能很好的懸于培養(yǎng)基中,細(xì)胞所帶的電荷與微球正好相反,培養(yǎng)時能相互吸引最終達(dá)到貼附生長的效果。1克球狀微載體大致4400平方厘米,相當(dāng)于19個T225方瓶,培養(yǎng)病毒時高密度細(xì)胞有利于病毒更好的增殖,通常培養(yǎng)滴度能提高1-2個滴度。
另一個片狀微體叫酯片載體,目前國內(nèi)使用最多的是武漢塞科成的產(chǎn)品,能達(dá)到1克/1300平方厘米,它的優(yōu)勢在于懸浮培養(yǎng)時,不像球狀微載體一樣需要沉降換液,直接進(jìn)行灌注培養(yǎng),時刻有新的培養(yǎng)基補充營養(yǎng),另個一個優(yōu)勢是在做流感類疫苗,接毒前通常要洗去細(xì)胞中殘留的血清,片狀載體可以抽去老培養(yǎng)基,直接加PBS進(jìn)行洗數(shù)次即可。缺點是細(xì)胞生長狀態(tài)不易觀察,通常通過糖耗速度來觀察細(xì)胞生長長勢,而微載體可以直接放倒置顯微鏡下觀察生長狀態(tài)。片狀載體對病毒滴度的提升僅0.5-1個滴度左右。
3.?純懸浮培養(yǎng):
??培養(yǎng)基不斷更新迭代,用戶對培養(yǎng)基中不含動物源成份的需求越來越強,逐漸出現(xiàn)了無血清培養(yǎng),純懸浮培養(yǎng)細(xì)胞逐漸被馴化出來,目前我所用到的純懸浮細(xì)胞有:BHK21、VERO、sf9、highfive、PK15、ST、HEK293A、HEK293F、MDCK等等,最大規(guī)模懸浮培養(yǎng)達(dá)到3000L。
培養(yǎng)成本僅貼壁細(xì)胞1/10。
?
總的來說,細(xì)胞培養(yǎng)的升級其實是培養(yǎng)基更新迭代的產(chǎn)物,兩者相互成就。

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懸浮培養(yǎng)

新蟲 (初入文壇)


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14樓2021-11-21 22:29:18
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tzynew3樓
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tjw08249樓
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asdgghjkl11樓
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