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tj690351018新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助酵母表達(dá)的一些問(wèn)題！
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新人培養(yǎng)酵母2個(gè)月了，一直表達(dá)不出來(lái)，求求各位大神救助�。�！ 本人一直在做某個(gè)蛋白的酵母分泌表達(dá)，除了電轉(zhuǎn)至GS115菌株外，還電轉(zhuǎn)了一個(gè)X33菌株。 前期用含2mg/ml ZEOCIN的YPD平板篩選出幾個(gè)單克隆，然后用BMGY（PH6.0）把單克隆培養(yǎng)起來(lái)，按OD=1的水平接種至BMMY（PH6.0）培養(yǎng)基中，每天添加1%甲醇作為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)酵母表達(dá)，持續(xù)誘導(dǎo)5天，每天都取樣檢測(cè)蛋白表達(dá)。 問(wèn)題是1.酵母培養(yǎng)液上請(qǐng)中分泌的蛋白極少，直接跑膠基本是空空如也，什么雜蛋白都觀察不到。 2.嘗試過(guò)TCA沉淀、硫酸銨沉淀和丙酮沉淀等方法，雖然可以沉淀出少量物質(zhì)，但是加水復(fù)溶后跑膠也是空空如也（約濃縮30倍），少數(shù)泳道會(huì)有微弱的蛋白泳道（但不是目的蛋白），這個(gè)情況正常嗎？ 3.按OD=1接種BMMY后，菌液24小時(shí)可以長(zhǎng)到15左右，后面每24小時(shí)大約長(zhǎng)2~3，前期生長(zhǎng)很快，大量的營(yíng)養(yǎng)用于菌體生長(zhǎng),所以后期生長(zhǎng)又很慢，我想知道是不是我的培養(yǎng)哪里出了問(wèn)題？ 4.酵母的味道很臭，是否正常？偶爾有一點(diǎn)酒味，但更多是一種類似于臭腳丫的味道  ，這個(gè)味道正常嗎？有沒(méi)有養(yǎng)酵母的大神可以指導(dǎo)一下，謝謝了！ |
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