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tj690351018新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助酵母表達的一些問題！
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新人培養(yǎng)酵母2個月了，一直表達不出來，求求各位大神救助�。�！ 本人一直在做某個蛋白的酵母分泌表達，除了電轉(zhuǎn)至GS115菌株外，還電轉(zhuǎn)了一個X33菌株。 前期用含2mg/ml ZEOCIN的YPD平板篩選出幾個單克隆，然后用BMGY（PH6.0）把單克隆培養(yǎng)起來，按OD=1的水平接種至BMMY（PH6.0）培養(yǎng)基中，每天添加1%甲醇作為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)酵母表達，持續(xù)誘導(dǎo)5天，每天都取樣檢測蛋白表達。 問題是1.酵母培養(yǎng)液上請中分泌的蛋白極少，直接跑膠基本是空空如也，什么雜蛋白都觀察不到。 2.嘗試過TCA沉淀、硫酸銨沉淀和丙酮沉淀等方法，雖然可以沉淀出少量物質(zhì)，但是加水復(fù)溶后跑膠也是空空如也（約濃縮30倍），少數(shù)泳道會有微弱的蛋白泳道（但不是目的蛋白），這個情況正常嗎？ 3.按OD=1接種BMMY后，菌液24小時可以長到15左右，后面每24小時大約長2~3，前期生長很快，大量的營養(yǎng)用于菌體生長,所以后期生長又很慢，我想知道是不是我的培養(yǎng)哪里出了問題？ 4.酵母的味道很臭，是否正常？偶爾有一點酒味，但更多是一種類似于臭腳丫的味道  ，這個味道正常嗎？有沒有養(yǎng)酵母的大神可以指導(dǎo)一下，謝謝了！ |
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