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醫(yī)學(xué)生物科研銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
可溶蛋白表達(dá)
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獲得大量目的蛋白的最簡(jiǎn)單最經(jīng)濟(jì)的方法是利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)外源基因。蛋白質(zhì)一直是生物工程研究的一個(gè)重要方面獲得大量純化的蛋白質(zhì)是蛋白質(zhì)理化性質(zhì)與功能研究的基礎(chǔ)。雖然20世紀(jì)90年代后有許多實(shí)驗(yàn)室利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞來(lái)表達(dá)外源蛋白但迄今原核的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)還是最常用的,因?yàn)榇竽c桿藻的遺傳 背景清楚表達(dá)高效經(jīng)濟(jì)方便。實(shí)驗(yàn)流程 1基因優(yōu)化:靶基因序列設(shè)計(jì)，密碼子優(yōu)化并合成目的基因。 2載體-宿主系統(tǒng)優(yōu)化:根據(jù)蛋白特性構(gòu)建表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化質(zhì)粒到高效表達(dá)的大腸桿菌中。 3、表達(dá)條件優(yōu)化:對(duì)重組的大腸桿菌進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，并通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)對(duì)表達(dá)條件(時(shí)間、溫度、IPTG濃度)進(jìn)行嚴(yán)格控制和優(yōu)化。 4、純化蛋白:對(duì)表達(dá)的蛋白采用親和，離子或凝膠過(guò)濾層析等方法進(jìn)行純化。最好選擇上清，次選蛋白復(fù)性，對(duì)實(shí)驗(yàn)用SDS-PAGE和WesternBlot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白純度正確性，按照客戶要求進(jìn)行分裝或凍干�？蛻繇氈� 1、無(wú)污染的質(zhì)粒，最小量不得低于100ng2原始質(zhì)粒圖譜及序列文件 3插入基因后質(zhì)粒的商業(yè)測(cè)序報(bào)告4目標(biāo)蛋白質(zhì)相關(guān)信息 5最終蛋白一般保存在常規(guī)的緩沖液中(Tris-HCIPBS)6我們提供Westem Blot的檢測(cè)服務(wù)交付標(biāo)準(zhǔn) 1、1-3mg蛋白 2、純度>70% 3、表達(dá)菌株 4、實(shí)驗(yàn)報(bào)告適用客戶 本套餐特別適用于已經(jīng)嘗試過(guò)蛋白表達(dá)小試，結(jié)果為兩種情況1無(wú)表達(dá)或表達(dá)量偏低2有表達(dá)但蛋白為包涵體。針對(duì)此類情況我們的重點(diǎn)是優(yōu)化表達(dá)條件，提高表達(dá)量，取得可溶性表達(dá)蛋白。服務(wù)周期2周 |
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