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醫(yī)學(xué)生物科研銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
可溶蛋白表達
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獲得大量目的蛋白的最簡單最經(jīng)濟的方法是利用原核表達系統(tǒng)表達外源基因。蛋白質(zhì)一直是生物工程研究的一個重要方面獲得大量純化的蛋白質(zhì)是蛋白質(zhì)理化性質(zhì)與功能研究的基礎(chǔ)。雖然20世紀(jì)90年代后有許多實驗室利用哺乳動物細胞來表達外源蛋白但迄今原核的大腸桿菌表達系統(tǒng)還是最常用的,因為大腸桿藻的遺傳 背景清楚表達高效經(jīng)濟方便。實驗流程 1基因優(yōu)化:靶基因序列設(shè)計，密碼子優(yōu)化并合成目的基因。 2載體-宿主系統(tǒng)優(yōu)化:根據(jù)蛋白特性構(gòu)建表達載體，轉(zhuǎn)化質(zhì)粒到高效表達的大腸桿菌中。 3、表達條件優(yōu)化:對重組的大腸桿菌進行搖瓶培養(yǎng)，并通過SDS-PAGE電泳檢測對表達條件(時間、溫度、IPTG濃度)進行嚴(yán)格控制和優(yōu)化。 4、純化蛋白:對表達的蛋白采用親和，離子或凝膠過濾層析等方法進行純化。最好選擇上清，次選蛋白復(fù)性，對實驗用SDS-PAGE和WesternBlot驗證目標(biāo)蛋白純度正確性，按照客戶要求進行分裝或凍干。客戶須知 1、無污染的質(zhì)粒，最小量不得低于100ng2原始質(zhì)粒圖譜及序列文件 3插入基因后質(zhì)粒的商業(yè)測序報告4目標(biāo)蛋白質(zhì)相關(guān)信息 5最終蛋白一般保存在常規(guī)的緩沖液中(Tris-HCIPBS)6我們提供Westem Blot的檢測服務(wù)交付標(biāo)準(zhǔn) 1、1-3mg蛋白 2、純度>70% 3、表達菌株 4、實驗報告適用客戶 本套餐特別適用于已經(jīng)嘗試過蛋白表達小試，結(jié)果為兩種情況1無表達或表達量偏低2有表達但蛋白為包涵體。針對此類情況我們的重點是優(yōu)化表達條件，提高表達量，取得可溶性表達蛋白。服務(wù)周期2周 |
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