 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1399 | 回復(fù): 0 | |||
北京艾柏森鐵蟲 (小有名氣)
|
[交流]
解救你的細(xì)胞污染
|
|
我們在進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)時(shí)，或多或少都經(jīng)歷過細(xì)胞污染的情況，一旦出現(xiàn)細(xì)胞污染的情況，全部細(xì)胞扔掉難免覺得可惜，之前花的時(shí)間、精力也全部打了水漂。 硬著頭皮接著往下做，做出的結(jié)果也缺乏說服力，還可能使污染情況更加嚴(yán)重。 細(xì)胞污染情況復(fù)雜，通常認(rèn)為的細(xì)胞污染都是微生物污染。但是凡混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染。 細(xì)胞污染不能完全被消除，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。細(xì)胞污染根據(jù)污染源主要可以分為物理性，化學(xué)性和生物性污染 一、物理性污染的來源、危害及預(yù)防 物理性污染常常被人們所忽視或被籠統(tǒng)地歸為化學(xué)性污染。物理性污染通過影響細(xì)胞培養(yǎng)體系中的生化成分，從而影響細(xì)胞的代謝。培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素，如溫度、放射線、振動(dòng)、輻射(紫外線或熒光)會對細(xì)胞產(chǎn)生影響。 細(xì)胞、培養(yǎng)液或其它培養(yǎng)試劑暴露于放射線、輻射或過冷過熱的溫度中，可以引起細(xì)胞代謝發(fā)生改變，如細(xì)胞同步化、細(xì)胞生長受抑制甚至細(xì)胞死亡。 細(xì)胞培養(yǎng)箱應(yīng)放在溫度較恒定的環(huán)境中，周圍不能放置能引起機(jī)械振動(dòng)的設(shè)備，如離心機(jī)等。培養(yǎng)液從冰箱中取出后應(yīng)在室溫中放置一段時(shí)間后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以避免過冷的溫度對細(xì)胞的影響。 二、化學(xué)性污染的來源、危害及預(yù)防 培養(yǎng)環(huán)境中許多化學(xué)物質(zhì)都可以引起細(xì)胞的污染�；瘜W(xué)物質(zhì)并不總是抑制細(xì)胞的生長，某些化學(xué)物質(zhì)如激素就可促進(jìn)細(xì)胞的生長。不同細(xì)胞對化學(xué)物質(zhì)污染的反應(yīng)是不一樣的。 未純化的物質(zhì)、試劑、水、血清、生長輔助因子及儲存試劑的容器都可能成為化學(xué)性污染的來源。細(xì)胞培養(yǎng)的必需養(yǎng)分若濃度超過了合適的范圍，也會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性。 同樣，不同細(xì)胞系其最佳培養(yǎng)條件下對血清和緩沖液的要求是不一樣的，在培養(yǎng)中應(yīng)嚴(yán)格控制。 動(dòng)物血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基，但血清又是潛在的生物及化學(xué)污染的來源。由于血清采集于多個(gè)動(dòng)物，而且不同廠商的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量各不相同，因此血清中許多成分的濃度存在很大的變異。 血清對不同細(xì)胞的促生長能力及毒副作用取決于這些細(xì)胞的分化功能、組織來源及培養(yǎng)基的成分等因素。在進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)時(shí)，為了保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性，最好選用同一批次的血清。 培養(yǎng)液、培養(yǎng)附加成分、試劑培養(yǎng)液、培養(yǎng)附加成分、試劑都可能成為化學(xué)性污染的來源。 三、微生物污染 由于體外培養(yǎng)的細(xì)胞自身沒有抵抗污染的能力，而在培養(yǎng)基中加抗生素的抗污染能力也是有限的，因而細(xì)胞微生物污染一旦發(fā)生往往是無法挽救的。 一般在細(xì)胞受到污染早期或污染較輕時(shí)，能及時(shí)處理并除去污染物，部分細(xì)胞還有可能得到挽救。但當(dāng)細(xì)胞持續(xù)在污染環(huán)境中生長時(shí)，輕者細(xì)胞生長緩慢；較重的細(xì)胞增殖停止，細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)大量堆積物，細(xì)胞變圓或崩解，從瓶壁脫落。 不同的微生物污染物對細(xì)胞的影響也有差別，微生物中支原體和病毒對細(xì)胞形態(tài)和技能的影響是長期的，緩慢的和潛在的。而霉菌和細(xì)菌增殖迅速，能在很短的時(shí)間內(nèi)抑制細(xì)胞生長或產(chǎn)生有毒物質(zhì)殺滅細(xì)胞。 芽孢桿菌、葡萄球菌是細(xì)菌污染的主要菌屬，污染的主要特征為培養(yǎng)基變黃、渾濁，低倍鏡下呈沙粒狀布滿細(xì)胞間隙或培養(yǎng)基，高倍鏡下可見桿狀或球狀的細(xì)菌在培養(yǎng)基中游動(dòng)。 常見的真菌污染是白色念珠菌污染，污染后培養(yǎng)基無明顯渾濁和變色，鏡下可見排列成串珠狀的球形真菌，污染嚴(yán)重時(shí)可見念珠菌連成片狀或團(tuán)狀。真菌的運(yùn)動(dòng)能力較弱，鏡下一般看不到運(yùn)動(dòng)。 霉菌污染時(shí)培養(yǎng)基一般也不變渾濁，顏色變化也不明顯，但肉眼可見漂浮的白色菌落，顯微鏡下可看到樹枝狀的菌絲。 支原體在鏡下無法看到，因而支原體污染時(shí)只能看到細(xì)胞狀態(tài)明顯變差卻沒有其他微生物污染的跡象，此時(shí)可通過PCR檢測確定。 還有一種被稱之為“黑膠蟲"的污染，在顯微鏡下觀察呈一粒一粒小黑點(diǎn)，成布朗運(yùn)動(dòng)，會阻礙細(xì)胞正常生長，對于這個(gè)說法眾說紛紜，有人說其就是細(xì)胞碎片（并不是它影響了細(xì)胞狀態(tài)，而是細(xì)胞狀態(tài)發(fā)生變化出現(xiàn)了黑膠蟲增多）；有人說這是玻璃培養(yǎng)瓶中的硅顆粒；有人認(rèn)為這是支原體污染（可穿過濾膜，可空氣傳播）；有認(rèn)為是真菌污染的；也有說是寄生類原蟲污染的…… 但也沒有一個(gè)明確的研究能夠證實(shí)這種情況，眾多的研究只是在驗(yàn)證這些猜想，現(xiàn)在也沒有一個(gè)明確的說法。 那么 如何急救呢？ 01 判斷污染源 一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染的跡象或已污染，需要立即對污染源進(jìn)行判斷：有無操作不當(dāng)？培養(yǎng)基、胰酶、PBS等顏色、澄清度是否正常？ 02 及時(shí)處理 若確定現(xiàn)有的培養(yǎng)基、胰酶、PBS可用，則繼續(xù)使用；若無法確定則新配完全培養(yǎng)基、PBS、胰酶，原有的液體在確定是否污染后再做處理。 以貼壁細(xì)胞為例 對細(xì)菌污染細(xì)胞進(jìn)行急救： 1 立即棄去培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基，以PBS潤洗2~3次，加入胰酶處理至細(xì)胞形態(tài)略有改變但未脫離容器時(shí)棄去胰酶，加入PBS輕輕潤洗1遍； 2 加入20×雙抗，浸泡細(xì)胞3~5min，棄去雙抗； 3 加入新鮮的完全培養(yǎng)基（含10×雙抗）培養(yǎng)12h； 4 12h棄去培養(yǎng)基以PBS潤洗2~3遍后加入完全培養(yǎng)基（含10×雙抗）； 5 傳代時(shí)以較小轉(zhuǎn)速離心（如平時(shí)以1000r/min離心，則可降為800~900r/min離心），仍以含10×雙抗的培養(yǎng)基培養(yǎng)； 6 若第二代后鏡下找不到細(xì)菌，則第三代起可正常培養(yǎng)。正常培養(yǎng)48h后無反彈則可認(rèn)為污染已清除。 若為霉菌污染，在以PBS潤洗2~3遍后換液，無需加入高濃度雙抗。培養(yǎng)48h后污染未再次出現(xiàn)即可。 若為真菌污染，在PBS潤洗、換液后可加入兩性霉素B（兩性霉素B有細(xì)胞毒性，不推薦使用），也可加入300μg/mL氟康唑培養(yǎng)，污染控制后改用150μg/mL培養(yǎng)2~3代。 若懷疑支原體污染，則可進(jìn)行PCR檢測或直接使用支原體清除試劑。也可購買環(huán)丙沙星注射液，于超凈臺內(nèi)打開直接添加到培養(yǎng)基中，以20μg/mL濃度2代后改用10μg/mL濃度持續(xù)培養(yǎng)約2周。 當(dāng)然，最優(yōu)解的方案還是復(fù)蘇更換新的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。最后祝愿大家都能培養(yǎng)健康正常的細(xì)胞 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
材料328求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
085600材料與化工（高分子）290分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
325求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
320材料與化工，求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿314求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
347求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿西交大材料學(xué)碩 346 求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
304分材料專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
085601 材料305分求助
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 北京艾柏森 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0857求調(diào)劑 +3 | CDDD1013 2026-03-04 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +5 | 等春來， 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
[考研] 化學(xué) 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211 +7 | 土土小蟲 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +3 | thext 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
材料325求調(diào)劑
 30+5
|
mariusuki 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +8 | yang婷 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +3 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請] 請問大家，研究風(fēng)險(xiǎn)與應(yīng)對措施那里， 大家都怎么寫呢 ？ +3 | cauasen 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +9 | 鹿沫笙 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0805總分292，求調(diào)劑 +12 | 幻想之殤 2026-03-01 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +11 | February_Feb 2026-03-01 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +4 | Ricardo1113 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑材料學(xué)碩 +4 | 詞凝Y 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +7 | axyz3 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 高分子化學(xué)與物理調(diào)劑
+6
|
好好好1233 2026-02-28 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +4 | 2103240126 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +11 | yunziaaaaa 2026-03-01 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 材料工程274求調(diào)劑 +5 | Lilithan 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 誠招農(nóng)業(yè)博士 +3 | 心欣向榮 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +9 | 材料專碩調(diào)劑； 2026-02-28 | 11/550 |
|