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只為成才鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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腸桿菌 基因敲除 詭異事件，求解！ 已有1人參與
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請(qǐng)教大家，我敲了一個(gè)基因（通過(guò)引入一個(gè)抗性片段），現(xiàn)在挑選 抗性板上的菌落 用 外部引物PCR片段測(cè)序，是敲除成功的，因?yàn)闇y(cè)序結(jié)果就是含有抗性片段，但是內(nèi)部引物PCR也還是能檢測(cè)到，測(cè)序結(jié)果表明也是我要敲除的那個(gè)基因，請(qǐng)問(wèn)是什么原因？ 1. 有點(diǎn)詭異的是，以前內(nèi)部引物只有一個(gè)條帶，后來(lái)長(zhǎng)出來(lái)的pcr發(fā)現(xiàn)有好幾個(gè)條帶了！ 2. 不知道有沒(méi)有這樣子的原因，我敲除的片段是該基因的五分之四，ATG開(kāi)頭的五分之一沒(méi)有敲除，這樣子會(huì)有影響嗎？但是我設(shè)計(jì)的內(nèi)部引物是后面部分的 這個(gè)菌我已經(jīng)在抗性板上劃線傳代兩次了！ |
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