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巴耶克新蟲 (初入文壇)
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Sephadex G-100凝膠柱使用問(wèn)題
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小弟最近在做多糖的分級(jí)純化，買了源葉的Sephadex G-100 100g，按照GE的說(shuō)明書預(yù)處理：90℃熱水溶脹5小時(shí)，待填料靜置后將上層碎凝膠棄去。柱子一開始選擇是2*100cm的規(guī)格（我看的文獻(xiàn)大多是用這么長(zhǎng)的柱子純化），將填料倒入柱子，凝膠床高度是80cm，不加壓情況下出液口流速越來(lái)越慢，甚至一分鐘都沒有一滴，最后直接不流了。我將凝膠壓出又選了一個(gè)3*60cm的層析柱，這次大概裝了50cm，待液面切平后上樣后加蒸餾水洗脫，流速越來(lái)越慢，我試著在上面加壓（用的那種增氧泵）過(guò)了一段時(shí)間后凝膠床膨脹到了60cm左右的高度，我趕緊把加壓泵撤掉了，隨著凝膠膨脹流速也不那么慢了。但是最后顯色結(jié)果表明多糖沒有分開，是一個(gè)寬峰。 這兩個(gè)多糖測(cè)GPC顯示一個(gè)分子量在7000，一個(gè)大概是40000，沒有分開。 想問(wèn)下各位大佬們，是哪里出問(wèn)題了？Sephadex G-100是不耐壓、不能裝太高嗎？但是要獲得好的分辨率就必須要把柱子裝高，這不就矛盾了嗎？我是不是需要加一個(gè)恒流泵，來(lái)控制流速？謝謝各位。 |
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4樓2022-06-29 15:51:30
2樓2021-07-13 17:00:55
akkarlie
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請(qǐng)問(wèn)樓主這個(gè)問(wèn)題解決了嗎？ 我前兩天剛搭上G75，2*100的柱子，也是流速越來(lái)越慢，是不是要換成短柱子才行呢？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2021-12-17 10:43:27
jyngxj
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5樓2022-06-30 12:30:32
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