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Sephadex G-100凝膠柱使用問題
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小弟最近在做多糖的分級純化，買了源葉的Sephadex G-100 100g，按照GE的說明書預處理：90℃熱水溶脹5小時，待填料靜置后將上層碎凝膠棄去。柱子一開始選擇是2*100cm的規(guī)格（我看的文獻大多是用這么長的柱子純化），將填料倒入柱子，凝膠床高度是80cm，不加壓情況下出液口流速越來越慢，甚至一分鐘都沒有一滴，最后直接不流了。我將凝膠壓出又選了一個3*60cm的層析柱，這次大概裝了50cm，待液面切平后上樣后加蒸餾水洗脫，流速越來越慢，我試著在上面加壓（用的那種增氧泵）過了一段時間后凝膠床膨脹到了60cm左右的高度，我趕緊把加壓泵撤掉了，隨著凝膠膨脹流速也不那么慢了。但是最后顯色結(jié)果表明多糖沒有分開，是一個寬峰。 這兩個多糖測GPC顯示一個分子量在7000，一個大概是40000，沒有分開。 想問下各位大佬們，是哪里出問題了？Sephadex G-100是不耐壓、不能裝太高嗎？但是要獲得好的分辨率就必須要把柱子裝高，這不就矛盾了嗎？我是不是需要加一個恒流泵，來控制流速？謝謝各位。 |
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