亚洲激情在线免费看片,老熟女一区二区三区四区五,成人精品1024欧美日韩

版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門版塊排行榜

返回列表

NanoFCMlxq

新蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 1017.6
帖子: 787
在線: 8.6小時(shí)
蟲號(hào): 26342463

已領(lǐng)完

線粒體相關(guān)研究文獻(xiàn)分享,輕松讀完一篇文獻(xiàn)（一）: 領(lǐng)取紅包 (小木蟲手機(jī)app專屬紅包)

掃一掃，下載小木蟲客戶端

今天分享一篇發(fā)表在Talanta（2020年IF=5.339）上的文章，名為《Rapid and quantitative in vitro analysis of mitochondrial fusion and its interplay with apoptosis》[1]（線粒體融合及其與凋亡的相互作用的快速和定量體外分析）。

線粒體是高度動(dòng)態(tài)的細(xì)胞器，不斷地進(jìn)行融合和分裂。線粒體融合除了通過內(nèi)容物混合維持基因組的穩(wěn)定性和生理功能，還與細(xì)胞凋亡、代謝和自噬有關(guān)。線粒體融合缺陷與許多人類疾病有關(guān)，如神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病和癌癥。由于線粒體融合缺失導(dǎo)致細(xì)胞線粒體網(wǎng)絡(luò)碎片化，研究線粒體融合最經(jīng)典的方法是基于線粒體形態(tài)學(xué)的微觀分析。然而，線粒體碎片可能是融合減少或裂變?cè)黾拥慕Y(jié)果，線粒體融合水平不能直接測(cè)量。由于線粒體融合和裂變協(xié)同調(diào)控線粒體形態(tài)和功能，線粒體融合在細(xì)胞凋亡和癌癥進(jìn)展中的直接作用仍不清楚。因此，對(duì)線粒體融合的直接定量測(cè)量是研究其在細(xì)胞過程和疾病發(fā)病機(jī)制中的重要作用以及篩選其調(diào)控因子的迫切需要。

線粒體分裂需要將細(xì)胞質(zhì)Drp1(一種裂變必需的動(dòng)力相關(guān)蛋白)募集到線粒體，并與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)合。與線粒體分裂不同，線粒體融合不依賴于細(xì)胞質(zhì)蛋白，可以通過線粒體膜內(nèi)嵌的GTPases來促進(jìn)。2004年首次報(bào)道了線粒體融合的體外研究，通過熒光顯微鏡展示其能量需求和分子水平促進(jìn)線粒體融合的過程。研究表明，體外融合實(shí)驗(yàn)可以真實(shí)再現(xiàn)體內(nèi)線粒體融合。通過將線粒體與細(xì)胞質(zhì)等亞細(xì)胞細(xì)胞器分離，可以最大限度地減少裂變等因素的干擾，使數(shù)據(jù)解釋更加直觀。此外，體外線粒體融合實(shí)驗(yàn)還可以揭示線粒體的內(nèi)在異質(zhì)性。線粒體融合的體外分析不僅為了解融合GTPases在調(diào)節(jié)線粒體附著和外膜(OM)、內(nèi)膜(IM)融合中的特定作用提供了重要的視角，而且促進(jìn)了融合調(diào)節(jié)因子的發(fā)現(xiàn)。熒光顯微鏡和電子顯微鏡(EM)是線粒體融合體外分析最常用的方法，但顯微技術(shù)是勞動(dòng)密集型和半定量的，在高通量篩選融合調(diào)節(jié)劑方面效率低下。

為了實(shí)現(xiàn)鞘流中單分子熒光檢測(cè)的策略，我們開發(fā)了納米流式檢測(cè)技術(shù)(nFCM)，它在側(cè)向散射和熒光檢測(cè)方面的靈敏度比傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)高出數(shù)百倍。利用實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的納米流式細(xì)胞儀(nFCM)在單個(gè)線粒體多參數(shù)分析方面的卓越靈敏性，我們報(bào)道了一種高通量和定量的體外線粒體融合測(cè)量方法。將分離的表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP-mito)和dissoma紅色熒光蛋白(DsRed-mito)的線粒體混合，誘導(dǎo)融合，并用nFCM分析。同時(shí)出現(xiàn)綠色和紅色熒光信號(hào)的顆粒被確定為異型融合顆粒。為了更好地理解線粒體融合和細(xì)胞凋亡之間的相互作用，本研究采用已開發(fā)的方法，研究胞質(zhì)凋亡通路對(duì)線粒體融合的影響，研究融合在細(xì)胞凋亡中的直接作用，并確定可以直接調(diào)節(jié)線粒體融合的化合物。

研究過程：

一、材料（略）

二、細(xì)胞培養(yǎng)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

HeLa細(xì)胞在含有10%胎牛血清的DMEM中培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染前12-24小時(shí)，將HeLa細(xì)胞置于12孔培養(yǎng)皿中，每孔2×10^5個(gè)細(xì)胞。來自Aequorea coerulescens和dissoma sp. red熒光蛋白(DsRed)的人源化GFP分別編碼為pAcGFP1-Mito和pDsRed2-Mito，這兩種蛋白均含有人細(xì)胞色素c氧化酶亞基VIII (Mito)的線粒體靶向序列。使用TransLipid HL轉(zhuǎn)染試劑將編碼GFP1-Mito或DsRed2-Mito的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到HeLa細(xì)胞中。兩種質(zhì)粒表達(dá)48 h后，加入250 ~ 500 μg/mL G418，3 ~ 4周篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞群被擴(kuò)增，并按照標(biāo)準(zhǔn)方案存儲(chǔ)。

三、線粒體和胞漿提取物的分離

每次實(shí)驗(yàn)，未轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞或穩(wěn)定表達(dá)線粒體靶向熒光蛋白(GFP或DsRed)的細(xì)胞在15cm板中培養(yǎng)至90%的融合度。為了制備凋亡細(xì)胞液，將未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞分別在含有250nM staurosporine的培養(yǎng)基中培養(yǎng)3和9 h。用胰蛋白酶法收集細(xì)胞，并用PBS洗滌。細(xì)胞顆粒在800 μL冷線粒體分離試劑A中重懸，用Dounce組織研磨機(jī)在冰上研磨60次得到細(xì)胞勻漿。將勻漿轉(zhuǎn)移到一個(gè)新管中，加入800 μL冷線粒體分離試劑C并混合。勻漿4度700 g離心10分鐘去除細(xì)胞核和完整的細(xì)胞，上清重復(fù)一次4度700 g離心10分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的試管中，12,000 g4度離心15分鐘。上清部分為胞漿富集部分。用BCA法測(cè)定線粒體和富細(xì)胞質(zhì)組分的蛋白濃度。將提取物分裝，在液氮中瞬間冷凍，凍干，并在?80度下保存?zhèn)溆谩?br />
四、線粒體體外融合

將含有160 μg總蛋白的分離線粒體混合物用100 μL FB-A重懸，4度16000 g離心濃縮10 min。在去除上清液之前，將濃縮的線粒體顆粒放在冰上孵育至少10分鐘。然后在40 μL FB-B (OM和IM融合過程)或FB-A (OM融合過程)中重懸，第二級(jí)融合在37度下進(jìn)行90分鐘。

五、胞質(zhì)提取物及化合物對(duì)線粒體融合的影響分析

為了分析不同細(xì)胞質(zhì)提取物對(duì)線粒體融合的影響，分別在第1階段(離心前添加5 min，第1階段保持)和第2階段，將分離的線粒體重懸在FB-A和FB-B制備的5mg/mL細(xì)胞質(zhì)提取物中。為了分析不同化合物對(duì)體外線粒體融合的影響，在第1階段(離心前添加5分鐘，并在第1階段保持)和第2階段(在FB-B重懸時(shí)添加)，分離的線粒體在指定濃度下與下列化學(xué)物質(zhì)孵育：白樺脂酸，20、40、60和200 μM；抗霉素A, 200 μM；順鉑200μM。融合樣品以0.3% DMSO(藥物溶劑的最高濃度)孵育作為溶劑對(duì)照。

六、線粒體膜電位分析(Δψm)

為了比較融合反應(yīng)和藥物治療陰性對(duì)照之間Δψm的差異，從未轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞中分離的線粒體在FB或MTB的第1階段和第2階段以指定濃度白樺脂酸處理。然后，測(cè)定Δψm，融合樣品和陰性對(duì)照在200 μL的500 nM DiOC6(3)中重懸，在37?C下孵育15分鐘，用MTB洗一次，nFCM分析。

七、納米流式檢測(cè)

采用納米流式檢測(cè)儀(nFCM)，使用488nm激光器(10 mW)和3個(gè)檢測(cè)通道對(duì)單個(gè)線粒體進(jìn)行分析。FL-1通道(520/35nm帶通濾光片)和FL-2通道(660/52nm帶通濾光片)分別檢測(cè)GFP的綠色熒光和DsRed的紅色熒光。在側(cè)向散射、綠色熒光(FL-1)和紅色熒光(FL-2)通道同時(shí)檢測(cè)光子爆發(fā)。

八、電子顯微鏡成像（略）

九、熒光成像（略）

十、Western blot檢測(cè)分離的胞漿提取物中的Bid和Bax（略）

結(jié)果展示：

結(jié)果就展示這么多，有興趣的話可以自己找這篇文獻(xiàn)具體看，或者私聊我要文獻(xiàn)資料，有理解得不對(duì)的地方，歡迎專業(yè)人士指正，一起交流~

參考文獻(xiàn)：

[1]Xu, J; Su, L; Han, J; et al.Rapid and quantitative in vitro analysis of mitochondrial fusion and its interplay with apoptosis.[J].Talanta.2021,222():121523

線粒體相關(guān)研究文獻(xiàn)分享,輕松讀完一篇文獻(xiàn)（一）

線粒體相關(guān)研究文獻(xiàn)分享,輕松讀完一篇文獻(xiàn)（一）-1

線粒體相關(guān)研究文獻(xiàn)分享,輕松讀完一篇文獻(xiàn)（一）-2

線粒體相關(guān)研究文獻(xiàn)分享,輕松讀完一篇文獻(xiàn)（一）-3

線粒體相關(guān)研究文獻(xiàn)分享,輕松讀完一篇文獻(xiàn)（一）-4

線粒體相關(guān)研究文獻(xiàn)分享,輕松讀完一篇文獻(xiàn)（一）-5

發(fā)自小木蟲Android客戶端

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

311求調(diào)劑已經(jīng)有3人回復(fù)
材料工程專碩調(diào)劑自薦信，初試323 已經(jīng)有6人回復(fù)
求調(diào)劑材料專碩293 已經(jīng)有4人回復(fù)
328，0703考生求調(diào)劑，一志愿為東北師范大學(xué) 已經(jīng)有4人回復(fù)
0857環(huán)境調(diào)劑已經(jīng)有3人回復(fù)
求調(diào)劑已經(jīng)有3人回復(fù)
一志愿江南大學(xué)085701環(huán)境工程專碩總分287求調(diào)劑已經(jīng)有3人回復(fù)
標(biāo)題:撿漏預(yù)警|08工科/09農(nóng)學(xué)調(diào)劑!英語要求低，過線即有機(jī)會(huì)! 已經(jīng)有8人回復(fù)
求調(diào)劑！已經(jīng)有3人回復(fù)
0703化學(xué)調(diào)劑已經(jīng)有3人回復(fù)

» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2021-06-04 17:59:12

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

簡單回復(fù)

wisdomdou2樓

2021-06-04 18:05 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

流逝之川3樓

2021-06-04 18:12 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

tzynew4樓

2021-06-04 18:13 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

1989青蘋果5樓

2021-06-04 18:18 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲IOS客戶端

jixiangbao6樓

2021-06-04 18:34 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲IOS客戶端

秋土豆香7樓

2021-06-04 18:39 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

Michael9898樓

2021-06-04 18:58 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

蕭曉笑小小9樓

2021-06-04 19:01 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

plantabiotic10樓

2021-06-04 19:07 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

Jzhang21311樓

2021-06-04 19:20 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

韓曉東021112樓

2021-06-04 19:43 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

1782911728913樓

2021-06-04 19:54 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

xspring080814樓

2021-06-04 20:04 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

kaka989715樓

2021-06-04 21:13 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲IOS客戶端

MoNluo16樓

2021-06-04 21:37 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

yi心靈感應(yīng)17樓

2021-06-04 21:44 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

Arthur01018樓

2021-06-04 22:09 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

螢火蟲之谷19樓

2021-06-04 22:16 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲IOS客戶端

gao1992070720樓

2021-06-04 22:27 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

goddance21樓

2021-06-04 22:32 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

liushuai1922樓

2021-06-05 00:35 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

天街小雨lhy23樓

2021-06-05 02:13 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

yxszzmk24樓

2021-06-05 06:01 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

15923647825樓

2021-06-05 07:17 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

herethere26樓

2021-06-05 07:37 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

103908996727樓

2021-06-05 14:09 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲IOS客戶端

憨憨做夢(mèng)28樓

2021-06-05 15:05 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

楊嘎嘎29樓

2021-06-05 16:55 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

quanliyifu30樓

2021-06-05 17:00 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲IOS客戶端

Kapok曲奇31樓

2021-06-06 00:37 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲IOS客戶端

richeng334432樓

2021-06-06 06:31 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲IOS客戶端

云在青天33樓

2021-06-06 12:18 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

cmx6789034樓

2021-06-06 20:36 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

bjdxyxy35樓

2021-06-07 14:38 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

hlp080936樓

2021-06-08 20:01 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

1375787937樓

2021-06-09 06:10 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

Cas9xman38樓

2021-06-09 09:22 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲IOS客戶端

星星女孩39樓

2021-06-09 18:49 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

年輪c40樓

2021-06-09 22:34 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

Vet is king41樓

2021-06-09 23:27 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲IOS客戶端

氣泡魚游游42樓

2021-06-14 21:40 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

nono200943樓

2021-06-20 22:02 回復(fù)

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

一葉知秋hu44樓

2021-06-23 10:26 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

小新⊙?⊙45樓

2021-06-23 10:36 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+1): 謝謝參與

已獲得1個(gè)金幣發(fā)自小木蟲Android客戶端

Demon-Jess46樓

2021-06-23 13:20 回復(fù)

NanoFCMlxq(金幣+2): 謝謝參與

已獲得2個(gè)金幣發(fā)自小木蟲IOS客戶端

相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn) 我要訂閱樓主 NanoFCMlxq 的主題更新

返回列表

普通表情龍兔虎貓高級(jí)回復(fù) (可上傳附件)

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 求調(diào)劑 +3	yfihxh 2026-03-09	3/150	2026-03-10 15:53 by houyaoxu
[考研] 一志愿東北大學(xué)080500，英一數(shù)二343分求調(diào)劑 +8	Seele_v5 2026-03-04	8/400	2026-03-10 14:51 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿211，0860總分286食品工程專業(yè)求調(diào)劑 +7	林林Winnie 2026-03-05	7/350	2026-03-10 14:47 by circleffyy
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +7	小奶蒼 2026-03-07	7/350	2026-03-10 05:17 by anny19840123
[基金申請(qǐng)] 面上項(xiàng)目還需要AI說明嗎？ +3	liyundong 2026-03-08	3/150	2026-03-09 22:30 by kingkocxr
[考研] 310 070300化學(xué)求調(diào)劑 +4	撲風(fēng)鈴的貓 2026-03-08	5/250	2026-03-09 19:46 by 30660438
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑，總分309分，一志愿華南師范 +3	花與葉@ 2026-03-08	3/150	2026-03-09 05:48 by houyaoxu
[考研] 材料工程330分求調(diào)劑，一志愿985 +3	小材化本科 2026-03-07	3/150	2026-03-09 05:35 by houyaoxu
[考研] 一志愿武理314求調(diào)劑 +4	（￣～￣;） 2026-03-08	5/250	2026-03-08 23:12 by L135790
[考研] 調(diào)劑 +3	13853210211 2026-03-08	3/150	2026-03-08 19:34 by ms629
[考研] 083000，總分284，求調(diào)劑 +5	徐yr 2026-03-04	5/250	2026-03-08 11:45 by 151314
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)312分求調(diào)劑 +7	T123 tt 2026-03-04	7/350	2026-03-08 11:18 by 我的船我的海
[考研] 085701環(huán)境工程317分求調(diào)劑 +9	6汆尼9 2026-03-07	9/450	2026-03-08 06:41 by 劉兵
[考研] 第一志愿上海大學(xué)，專業(yè)化學(xué)工程與技術(shù)，總分288，求調(diào)劑 +3	1829197082 2026-03-07	3/150	2026-03-07 19:14 by houyaoxu
[考研] 材料專碩290求調(diào)劑 +8	杰尼龜aaa 2026-03-04	8/400	2026-03-06 16:06 by @颯颯颯颯
[考研] 材料085601一志愿哈工大317 +4	壓迫感行 2026-03-04	4/200	2026-03-05 20:08 by 黑衣饅頭人
[考研] 紡織、生物、化學(xué)、材料等專業(yè) +3	Eember. 2026-03-05	7/350	2026-03-05 16:35 by Eember.
[考研] 求調(diào)劑 +7	博斯特525 2026-03-04	7/350	2026-03-04 18:09 by houyaoxu
[考研] 一志愿西交大材料學(xué)碩 346 求調(diào)劑 +3	zju51 2026-03-04	3/150	2026-03-04 13:01 by zhukairuo
[考研] 298求調(diào)劑一志愿中海洋 +3	lour. 2026-03-03	3/150	2026-03-03 20:41 by gxg2025

亭亭五月天在线观看,亭亭五月天在线观看,国产最新av一区二区,国产 高清 中文字幕,99re热久久亚洲综合精品成人,熟妇 一区二区三区,一级做a爰片性色毛片武则天,美女的骚穴视频播放,国产美女午夜免费视频

24小時(shí)熱門版塊排行榜

NanoFCMlxq

» 猜你喜歡

» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到: 查看全部散金貼

亭亭五月天在线观看,亭亭五月天在线观看,国产最新av一区二区,国产高清中文字幕,99re热久久亚洲综合精品成人,熟妇一区二区三区,一级做a爰片性色毛片武则天,美女的骚穴视频播放,国产美女午夜免费视频

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼