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喵七姑娘新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助跑膠老在孔里是啥原因啊 已有1人參與
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之前跑膠沒有問題，怎么最近老出現在孔里很亮的現象啊，第3，4孔，有知道的小伙伴嗎？拜托了 @biostar2009 @飛約瘋人院 @wizardfan @youlinglyw 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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原海亮
木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數 +1
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首先，你應該分析的是，經常出現這樣異�，F象是哪一類樣品？是pcr產物？是質粒酶切？是基因組DNA？還是無論什么樣品都會出現這種現象呢？ 因為不知道你有問題的樣品是什么，但從你的膠圖上看，marker和其他樣品均還是可以正常的遷移，證明瓊脂糖凝膠應該沒大問題（為保險也可所有緩沖液都換新的 嘗試）。 那么推測，你最近出現這種現象的樣品應該是只有某一種類型的樣品，而且大概率是抽提的質�；蛘呋蚪MDNA，比如3/4泳道的問題，大概率是你上樣樣品本身的問題，可以考慮是不是樣品提取處理的時候，有一些溶劑的殘留或者蛋白質的殘留，可以多加一步除蛋白的步驟，降低樣品粘度，應該會有一些緩解。 同時，如果你的樣品本身分子量就比較大，比如基因組DNA，遷移速度很慢的，就有可能在你marker或其他小分子樣品已經分布開時，這類大分子的樣品還停留在樣品孔附近，按照大分子遷移慢的邏輯，這屬于正常的現象。當然如果想解決這類大分子DNA檢測問題，你可以嘗試降低一些瓊脂糖凝膠的濃度（濃度高分辨率高，但不利于大分子分離，應根據樣品的大小選擇合適濃度），增加一下膠的長度和電泳時間，這樣有助于大分子DNA的遷移分離，同時適當降低上樣量可能會拿到一個相對漂亮一些的結果。 祝好！ |
2樓2021-06-04 10:57:13
喵七姑娘
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3樓2021-06-04 14:20:13
abcjlm
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- 專業(yè): 微生物遺傳育種學
4樓2021-06-06 17:06:37
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