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喵七姑娘新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求助跑膠老在孔里是啥原因啊 已有1人參與
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之前跑膠沒(méi)有問(wèn)題，怎么最近老出現(xiàn)在孔里很亮的現(xiàn)象啊，第3，4孔，有知道的小伙伴嗎？拜托了 @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan @youlinglyw 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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原海亮
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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首先，你應(yīng)該分析的是，經(jīng)常出現(xiàn)這樣異�，F(xiàn)象是哪一類樣品？是pcr產(chǎn)物？是質(zhì)粒酶切？是基因組DNA？還是無(wú)論什么樣品都會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象呢？ 因?yàn)椴恢滥阌袉?wèn)題的樣品是什么，但從你的膠圖上看，marker和其他樣品均還是可以正常的遷移，證明瓊脂糖凝膠應(yīng)該沒(méi)大問(wèn)題（為保險(xiǎn)也可所有緩沖液都換新的 嘗試）。 那么推測(cè)，你最近出現(xiàn)這種現(xiàn)象的樣品應(yīng)該是只有某一種類型的樣品，而且大概率是抽提的質(zhì)粒或者基因組DNA，比如3/4泳道的問(wèn)題，大概率是你上樣樣品本身的問(wèn)題，可以考慮是不是樣品提取處理的時(shí)候，有一些溶劑的殘留或者蛋白質(zhì)的殘留，可以多加一步除蛋白的步驟，降低樣品粘度，應(yīng)該會(huì)有一些緩解。 同時(shí)，如果你的樣品本身分子量就比較大，比如基因組DNA，遷移速度很慢的，就有可能在你marker或其他小分子樣品已經(jīng)分布開(kāi)時(shí)，這類大分子的樣品還停留在樣品孔附近，按照大分子遷移慢的邏輯，這屬于正常的現(xiàn)象。當(dāng)然如果想解決這類大分子DNA檢測(cè)問(wèn)題，你可以嘗試降低一些瓊脂糖凝膠的濃度（濃度高分辨率高，但不利于大分子分離，應(yīng)根據(jù)樣品的大小選擇合適濃度），增加一下膠的長(zhǎng)度和電泳時(shí)間，這樣有助于大分子DNA的遷移分離，同時(shí)適當(dāng)降低上樣量可能會(huì)拿到一個(gè)相對(duì)漂亮一些的結(jié)果。 祝好！ |
2樓2021-06-04 10:57:13
喵七姑娘
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3樓2021-06-04 14:20:13
abcjlm
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4樓2021-06-06 17:06:37
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