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小樹(shù)懶很好新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
his蛋白掛柱效率低 已有1人參與
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C端6xhis蛋白（108kda）純化時(shí)，使用GE的6FF樹(shù)脂，載量為每毫升樹(shù)脂載40mg標(biāo)簽蛋白，確定不過(guò)載。 且質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果正確，ORF框及his標(biāo)簽均正確。 嘗試將his標(biāo)簽增加至10his，或在N端再添加 6xhis后，仍在流出液中有大量目的蛋白存在。 改變上柱的粗酶液的濃度及上樣標(biāo)簽蛋白量也沒(méi)能改善 求助該如何解決呢 @hc-material @gyesang 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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2樓2021-04-19 00:43:42
Nansenary
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3樓2021-04-19 00:43:59
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4樓2021-04-19 12:31:53
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5樓2021-04-19 19:08:12
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我們老師不太想換標(biāo)簽，怕萬(wàn)一換了標(biāo)簽還是純化不出來(lái)，白費(fèi)時(shí)間，想看看大家有沒(méi)有過(guò)類(lèi)似的成功案例，能拿來(lái)借鑒一下 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
6樓2021-04-19 19:10:30
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7樓2021-04-19 22:40:11
ericdoner
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1.上樣我們一般咪唑濃度20mM。2.載量我們一般計(jì)算動(dòng)態(tài)載量，最大載量我們一般是不考慮的，動(dòng)態(tài)載量一般是最大載量的百分之30。3.根據(jù)柱直徑，柱床高度，降低上樣速度。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
8樓2021-04-22 19:53:55
snoopyzxx
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9樓2021-04-22 21:16:29
snoopyzxx
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另外你需要搞清楚你標(biāo)記的那條帶到底是不是你的目的帶。與目的帶大小一致不一定是目的帶，也可能是菌體蛋白。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
10樓2021-04-22 21:18:48
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