【有獎交流】積極回復(fù)本帖子，參與交流，就有機會分得作者 xbwwsq 的 4 個金幣，回帖就立即獲得 1 個金幣，每人有 1 次機會

xbwwsq

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 342.8
帖子: 51
在線: 52.7小時
蟲號: 1302504

[交流] qPCR檢測限為什么不是拷貝數(shù)/反應(yīng)，而是拷貝數(shù)/mL

目前看到的關(guān)于新冠等核酸檢測試劑盒標明的檢測限都是“拷貝數(shù)/mL”，這是怎么測出來的，看了很多文章都說是利用已知濃度的病毒顆�；蛸|(zhì)粒十倍稀釋后看最低能檢測到的拷貝數(shù)，并沒有寫明詳細做法。不理解的是，為什么檢測限不以“拷貝數(shù)/反應(yīng)”來表示，比如1000拷貝/mL的樣品1mL，模板加10μL和1μL肯定是不一樣的，所以這個1000拷貝/mL表示一個反應(yīng)能檢測到多少呢。如果我們自己設(shè)計qPCR反應(yīng)，檢測限應(yīng)該達到多少個拷貝/反應(yīng)才是合適的呢，自己做實驗的時候500個拷貝/反應(yīng)的ct值就已經(jīng)36了，是哪里的問題呢

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

推薦一些20種氨基酸檢測的實際應(yīng)用案例已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費? 已經(jīng)有215人回復(fù)
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)

» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2021-04-12 14:26:38

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

回帖支持 ( 顯示支持度最高的前 50 名 )

山舞銀蛇

鐵桿木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 51 (初中生)
金幣: 7358.6
帖子: 429
在線: 200.8小時
蟲號: 601837

★
xbwwsq(金幣+1): 謝謝參與

cp/ml是以初始樣本計算的，做得好的，可以做到100cp/ml。
然后取200μl樣本，也就是取到了20個cp，經(jīng)過核酸提取，回收率一般30~70%，還剩6~14 cp。
洗脫體積50，算上蒸發(fā)，剩余30μl 核酸，如果上樣20μl，就是4~9 cp。
那么對應(yīng)PCR部分不計算提取的檢出限就是4~9 cp/PCR

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

6樓2021-04-25 14:49:10

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

xbwwsq

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 342.8
帖子: 51
在線: 52.7小時
蟲號: 1302504

引用回帖:

6樓: Originally posted by 山舞銀蛇 at 2021-04-25 14:49:10
cp/ml是以初始樣本計算的，做得好的，可以做到100cp/ml。
然后取200μl樣本，也就是取到了20個cp，經(jīng)過核酸提取，回收率一般30~70%，還剩6~14 cp。
洗脫體積50，算上蒸發(fā)，剩余30μl 核酸，如果上樣20μl，就是4~ ...

老師您好，謝謝您的回答，很好奇qPCR真能做到10 copy/反應(yīng)啊，我平時做實驗挺粗放，沒有做過這么細。我現(xiàn)在做到500copy/反應(yīng)的Ct值就已經(jīng)34、35了，請問這個原因是什么呢，是因為引物設(shè)計的不夠好嗎。我的擴增效率用sybrgreen染料法測，計算下來是90%，應(yīng)該也還行啊。期待您的回復(fù)

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

8樓2021-05-19 23:47:33

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

山舞銀蛇

鐵桿木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 51 (初中生)
金幣: 7358.6
帖子: 429
在線: 200.8小時
蟲號: 601837

引用回帖:

9樓: Originally posted by xbwwsq at 2021-05-19 23:52:50
另外，如果這1ml（100cp/ml）的樣本全部提取，然后用50ul洗脫，假設(shè)蒸發(fā)后剩30，上樣20ul的話，這樣計算下來每個反應(yīng)是20-50cp/PCR，那么是不是也可以宣稱這個試劑檢測下限是100cp/ml 呢，這豈不是有點亂套...

不亂套，以cp/ml計算，只管你樣本初始濃度，評估的是整套提取+擴增的性能，檢出限只要你保證95%以上檢出率就行。我之前做HBV檢測，600多上樣量，做到2 IU/ml（＜12cp/ml，3cp/PCR）就這么做的。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

12樓2021-05-22 08:37:52

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

xbwwsq

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 342.8
帖子: 51
在線: 52.7小時
蟲號: 1302504

引用回帖:

另外，如果這1ml（100cp/ml）的樣本全部提取，然后用50ul洗脫，假設(shè)蒸發(fā)后剩30，上樣20ul的話，這樣計算下來每個反應(yīng)是20-50cp/PCR，那么是不是也可以宣稱這個試劑檢測下限是100cp/ml 呢，這豈不是有點亂套

贊一下

回復(fù)此樓

9樓2021-05-19 23:52:50

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

山舞銀蛇

鐵桿木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 51 (初中生)
金幣: 7358.6
帖子: 429
在線: 200.8小時
蟲號: 601837

引用回帖:

8樓: Originally posted by xbwwsq at 2021-05-19 23:47:33
老師您好，謝謝您的回答，很好奇qPCR真能做到10 copy/反應(yīng)啊，我平時做實驗挺粗放，沒有做過這么細。我現(xiàn)在做到500copy/反應(yīng)的Ct值就已經(jīng)34、35了，請問這個原因是什么呢，是因為引物設(shè)計的不夠好嗎。我的擴增效率 ...

我自己做Taqman方法的，基本都在3~4 cp/PCR，100~1000cp/ml的水平，取決于提取體系、擴增體系的大小。

贊一下

回復(fù)此樓

11樓2021-05-22 08:34:59

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

簡單回復(fù)

tzynew2樓

2021-04-12 14:29 回復(fù)

xbwwsq(金幣+1): 謝謝參與

i 發(fā)自小木蟲Android客戶端

psylhh3樓

2021-04-12 20:48 回復(fù)

xbwwsq(金幣+1): 謝謝參與

miaojiabing4樓

2021-04-14 15:12 回復(fù)

xbwwsq(金幣+1): 謝謝參與

bjdxyxy5樓

2021-04-14 23:02 回復(fù)

xbwwsq(金幣+1): 謝謝參與

。發(fā)自小木蟲Android客戶端

bjdxyxy7樓

2021-04-25 15:24 回復(fù)

。發(fā)自小木蟲Android客戶端

bjdxyxy10樓

2021-05-20 11:26 回復(fù)

。發(fā)自小木蟲Android客戶端

nono200913樓

2021-10-01 09:14 回復(fù)

xbwwsq(金幣+1): 謝謝參與

刀劈三關(guān)14樓

2021-10-04 21:27 回復(fù)

。

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 0856材料求調(diào)劑 +15	hyf hyf hyf 2026-02-28	16/800	2026-03-04 22:12 by 學(xué)zh
[考研] 材料專碩290求調(diào)劑 +3	杰尼龜aaa 2026-03-04	3/150	2026-03-04 15:31 by syfwater
[考研] 347求調(diào)劑 +5	啊歐歐歐 2026-03-03	5/250	2026-03-04 14:10 by kakakapanpan
[考研] 材料325求調(diào)劑 30+5	mariusuki 2026-03-02	10/500	2026-03-04 09:24 by njzyff
[考研] 298求調(diào)劑 +3	人間唯你是清歡 2026-03-03	4/200	2026-03-03 18:09 by ms629
[考研] 283求調(diào)劑 +9	鹿沫笙 2026-03-02	9/450	2026-03-03 15:58 by tgxtgxtgx9
[考研] 一志愿中科大能動297求調(diào)劑，本科川大 +3	邵11 2026-03-03	3/150	2026-03-03 14:50 by 新能源達人
[考研] 278求調(diào)劑 +3	滿天星11_22 2026-03-02	3/150	2026-03-03 13:51 by Iveryant
[考研] 化學(xué)0703求調(diào)劑學(xué)碩理/工科均可總分279 +3	1一11 2026-03-03	5/250	2026-03-03 12:37 by 1一11
[考研] 26考研報考西工大材料308分求調(diào)劑 +4	weizhong123 2026-03-01	5/250	2026-03-03 12:22 by weizhong123
[考研] 291求調(diào)劑 +3	MuoLuo1312 2026-03-02	6/300	2026-03-03 12:13 by 熱情沙漠
[考研] 沒上岸的看過來 +3	tangxiaotian 2026-03-01	3/150	2026-03-03 12:03 by emokidd
[考研] 材料工程求調(diào)劑 +3	1431251 2026-03-03	3/150	2026-03-03 11:58 by EBSD
[考研] 化工京區(qū)271求調(diào)劑 +7	11ing 2026-03-02	7/350	2026-03-03 07:30 by 利好利好.
[考研] 0856調(diào)劑 +10	劉夢微 2026-02-28	10/500	2026-03-02 23:42 by hcy618
[考研] 材料與化工328求調(diào)劑 +3	。，。，。，。i 2026-03-02	3/150	2026-03-02 13:09 by houyaoxu
[考研] 291 求調(diào)劑 +3	化工2026屆畢業(yè)?/a> 2026-03-02	3/150	2026-03-02 12:55 by houyaoxu
[考研] 材料學(xué)調(diào)劑 +10	提神豆沙包 2026-02-28	12/600	2026-03-02 09:26 by 李老師！
[考研] 化工299分求調(diào)劑一志愿985落榜 +5	嘻嘻(^ω^) 2026-03-01	5/250	2026-03-01 19:47 by 無際的草原
[論文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3	luckyry 2026-02-26	4/200	2026-03-01 09:06 by babero