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Ma丶lone新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助，畢赤酵母系統(tǒng)表達(dá)阿魏酸酯酶，蛋白沒(méi)有活性，可能哪些問(wèn)題，該怎么解決現(xiàn)狀？ 已有2人參與
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本人初入分子生物，用PPIZCA質(zhì)粒重組了阿魏酸酯酶的基因序列，然后我把重組質(zhì)粒導(dǎo)入畢赤酵母中。結(jié)果是，PCR和測(cè)序驗(yàn)證基因大小和序列沒(méi)問(wèn)題，western blot也做了能看到所在處清晰的條帶，但是有一次出現(xiàn)了包涵體，這一次沒(méi)有，我用這一次的粗酶液和提純的蛋白測(cè)試酶活性，結(jié)果一點(diǎn)活性沒(méi)有。請(qǐng)教大佬幫我分析一下可能的原因和解決辦法。 @gyesang @hc-material 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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Ma丶lone
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 18.1
- 帖子: 24
- 在線: 7.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 13710691
- 注冊(cè): 2019-01-01
- 專業(yè): 生物化學(xué)
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可溶提純的，我有histag標(biāo)簽我用的親和層析法提純的。我的基因序列對(duì)，電泳分子大小也對(duì)，蛋白條帶也對(duì)，就是酶活沒(méi)有。這個(gè)你碰到過(guò)嗎？還是我酶活檢測(cè)的樣品太少了嗎？或者中間被我弄失活了？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
9樓2021-03-30 14:24:29
forhighbio 
捐助貴賓 (著名寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 825.8
- 散金: 100
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- 在線: 20.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 15753792
- 注冊(cè): 2019-07-28
- 專業(yè): 微生物學(xué)
2樓2021-03-28 11:07:24
fuyuandj86
版主 (著名寫(xiě)手)
己所不欲，勿施于人
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- 專業(yè): 生物化學(xué)
- 管轄: 生物科學(xué)
3樓2021-03-28 12:48:27
snoopyzxx
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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4樓2021-03-28 22:42:20
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剛錄用，沒(méi)有期刊號(hào)，但是在線可看的論文可以放為代表作嗎
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