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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 關于FISH的一些疑問
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關于FISH的一些疑問
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我方向是環(huán)境工程偏微生物(厭氧氨氧化)，需要觀察反應器內活的厭氧氨氧化細菌隨時間數(shù)量的變化。看文獻的描述，測定的方法是測MLVSS結合live/dead實驗以及FISH實驗，我的問題是: 1）FISH實驗中，能夠與探針原位雜交的細菌只是活的嘛，還是死的活的都能與探針雜交?原理是為什么 2）FISH實驗中為何需要用多聚甲醛等物質對細菌進行固定這一步驟？固定是指固定細菌的移動還是形狀還是其它？不固定后果是什么？ 望大神解答感激不盡！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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送紅花一朵 
5樓2021-03-19 22:49:36
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先回答（2），F(xiàn)ISH的固定步驟主要是為了穩(wěn)定大分子和細胞骨架結構，避免雜交的過程中細胞裂解。參考如下https://www.arb-silva.de/fish-pr ... =General%20overview,of%20the%20cells%20during%20hybridization. 這個過程基本上對細胞會造成很大影響，固定完細胞也差不多死了。 對于你提到的（1），我不清楚你指的是想只針對采樣中的活細胞進行檢測呢？還是說需要在檢測中操持細胞活性？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
2樓2021-03-16 00:45:29
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非常感謝您的回答，對于1）我的意思是FISH中用到的探針，比如專門與大腸桿菌染色體雜交的探針，能夠與初始狀態(tài)的樣品中死的大腸桿菌雜交嗎，還是只能夠與初始狀態(tài)的樣品中活的大腸桿菌雜交。我問這個問題是因為，我需要測定一個成分不單一(有多種細菌包含在內)的污泥中的其中一種細菌的活細菌數(shù)量隨時間變化，而在看到的文獻中為了測量這一種細菌的活菌數(shù)量，是用總的MLVSS(表示所有種類，活的死的細菌總的數(shù)量)，乘以LIVE/DEAD值(表示所有細菌中活細菌的比例，但不區(qū)分細菌種類)，再乘以FISH值(即用兩種探針，一種是能夠與所有細菌種類雜交的探針，另一種是只能夠與目的種類的細菌雜交的特異性探針，即能夠得到該目的細菌占所有細菌數(shù)量的比例)，我不懂的就是，按照這種方法如果是正確的，那么FISH過程中是不是只有樣品中原本活著的細菌才能夠與探針雜交，樣品中已經死的細菌，是不是細菌的染色體成分在死后很快就分解了(我不太了解細菌死亡后的生理過程)，因此通過FISH雜交也檢測不出來 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2021-03-17 16:28:49
4樓2021-03-17 16:30:46
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