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關(guān)于FISH的一些疑問
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我方向是環(huán)境工程偏微生物(厭氧氨氧化)，需要觀察反應(yīng)器內(nèi)活的厭氧氨氧化細(xì)菌隨時間數(shù)量的變化。看文獻(xiàn)的描述，測定的方法是測MLVSS結(jié)合live/dead實(shí)驗以及FISH實(shí)驗，我的問題是: 1）FISH實(shí)驗中，能夠與探針原位雜交的細(xì)菌只是活的嘛，還是死的活的都能與探針雜交?原理是為什么 2）FISH實(shí)驗中為何需要用多聚甲醛等物質(zhì)對細(xì)菌進(jìn)行固定這一步驟？固定是指固定細(xì)菌的移動還是形狀還是其它？不固定后果是什么？ 望大神解答感激不盡！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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4樓2021-03-17 16:30:46
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先回答（2），F(xiàn)ISH的固定步驟主要是為了穩(wěn)定大分子和細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)，避免雜交的過程中細(xì)胞裂解。參考如下https://www.arb-silva.de/fish-pr ... =General%20overview,of%20the%20cells%20during%20hybridization. 這個過程基本上對細(xì)胞會造成很大影響，固定完細(xì)胞也差不多死了。 對于你提到的（1），我不清楚你指的是想只針對采樣中的活細(xì)胞進(jìn)行檢測呢？還是說需要在檢測中操持細(xì)胞活性？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
迪妮莎的淚2樓2021-03-16 00:45:29
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非常感謝您的回答，對于1）我的意思是FISH中用到的探針，比如專門與大腸桿菌染色體雜交的探針，能夠與初始狀態(tài)的樣品中死的大腸桿菌雜交嗎，還是只能夠與初始狀態(tài)的樣品中活的大腸桿菌雜交。我問這個問題是因為，我需要測定一個成分不單一(有多種細(xì)菌包含在內(nèi))的污泥中的其中一種細(xì)菌的活細(xì)菌數(shù)量隨時間變化，而在看到的文獻(xiàn)中為了測量這一種細(xì)菌的活菌數(shù)量，是用總的MLVSS(表示所有種類，活的死的細(xì)菌總的數(shù)量)，乘以LIVE/DEAD值(表示所有細(xì)菌中活細(xì)菌的比例，但不區(qū)分細(xì)菌種類)，再乘以FISH值(即用兩種探針，一種是能夠與所有細(xì)菌種類雜交的探針，另一種是只能夠與目的種類的細(xì)菌雜交的特異性探針，即能夠得到該目的細(xì)菌占所有細(xì)菌數(shù)量的比例)，我不懂的就是，按照這種方法如果是正確的，那么FISH過程中是不是只有樣品中原本活著的細(xì)菌才能夠與探針雜交，樣品中已經(jīng)死的細(xì)菌，是不是細(xì)菌的染色體成分在死后很快就分解了(我不太了解細(xì)菌死亡后的生理過程)，因此通過FISH雜交也檢測不出來 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2021-03-17 16:28:49
5樓2021-03-19 22:49:36
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