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victor_u新蟲 (小有名氣)
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如何培養(yǎng)細胞？——新手入門 已有1人參與
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簡介：一枚生命科學行業(yè)的技術控，共同學習，歡迎補充。 什么是細胞培養(yǎng)？ 細胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術。 不論對于整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養(yǎng)都是一個必不可少的過程，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)�？寺�。細胞培養(yǎng)技術可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術必不可少的環(huán)節(jié)，而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。 細胞培養(yǎng)技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術，通過細胞培養(yǎng)既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉(zhuǎn)導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。 接下來介紹一些常見問題解決方法。 1.冷凍管應如何解凍？ 取出冷凍管后，須立即放入37 °C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。 2. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基？ 不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞可能無法立即適應，導致細胞狀態(tài)不好甚至死亡。 3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的血清？ 不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 4. 培養(yǎng)細胞時應使用多少濃度的CO2？5%還是10%，或根本沒有影響？ 一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時，細胞培養(yǎng)時應使用10% CO2；當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時，則應使用5% CO2 培養(yǎng)細胞。 5. 何時須更換培養(yǎng)基？ 視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。 6. 培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？ 除特殊篩選系統(tǒng)外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應添加任何抗生素，但實際操作中有時會加入1%的青鏈霉素來避免細菌污染。 7. 懸浮細胞應如何繼代處理？ 一般僅需在原培養(yǎng)瓶中持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多，可將培養(yǎng)瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞的培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)瓶，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度，重復前述步驟即可。 8. 一般動物細胞的離心速率應為多少轉(zhuǎn)速？ 欲回收動物細胞，其離心速率一般為300 g (約1,000 rpm)，5-10分鐘，過高轉(zhuǎn)速將造成細胞死亡。 9. 合適的細胞接種密度是多少？ 依照細胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦可能會導致細胞生長過慢。 【互動回帖吧】 關于細胞培養(yǎng)過程中會遇到各種各樣的問題，比如胞質(zhì)疏松，細胞狀態(tài)不好，養(yǎng)不起來等等，你們會如何解決這些問題呢？回帖分享下吧~ |
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2樓2021-10-13 00:17:52
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