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victor_u新蟲(chóng) (小有名氣)
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如何培養(yǎng)細(xì)胞？——新手入門(mén) 已有1人參與
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簡(jiǎn)介：一枚生命科學(xué)行業(yè)的技術(shù)控，共同學(xué)習(xí)，歡迎補(bǔ)充。 什么是細(xì)胞培養(yǎng)？ 細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等），使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。 不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)必不可少的過(guò)程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)�？寺 ＜�(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞，又可以借此研究細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝、細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖等。 接下來(lái)介紹一些常見(jiàn)問(wèn)題解決方法。 1.冷凍管應(yīng)如何解凍？ 取出冷凍管后，須立即放入37 °C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。 2. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基？ 不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞可能無(wú)法立即適應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不好甚至死亡。 3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的血清？ 不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。 4. 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用多少濃度的CO2？5%還是10%，或根本沒(méi)有影響？ 一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10% CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時(shí)，則應(yīng)使用5% CO2 培養(yǎng)細(xì)胞。 5. 何時(shí)須更換培養(yǎng)基？ 視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。 6. 培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？ 除特殊篩選系統(tǒng)外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素，但實(shí)際操作中有時(shí)會(huì)加入1%的青鏈霉素來(lái)避免細(xì)菌污染。 7. 懸浮細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理？ 一般僅需在原培養(yǎng)瓶中持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基，稀釋細(xì)胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多，可將培養(yǎng)瓶口端稍微抬高，直到無(wú)法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞的培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)瓶，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度，重復(fù)前述步驟即可。 8. 一般動(dòng)物細(xì)胞的離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？ 欲回收動(dòng)物細(xì)胞，其離心速率一般為300 g (約1,000 rpm)，5-10分鐘，過(guò)高轉(zhuǎn)速將造成細(xì)胞死亡。 9. 合適的細(xì)胞接種密度是多少？ 依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤(pán)的比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)慢。 【互動(dòng)回帖吧】 關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題，比如胞質(zhì)疏松，細(xì)胞狀態(tài)不好，養(yǎng)不起來(lái)等等，你們會(huì)如何解決這些問(wèn)題呢？回帖分享下吧~ |
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2樓2021-10-13 00:17:52
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