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victor_u新蟲 (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于細(xì)胞破碎技術(shù)與方法，一起了解下~ 已有4人參與
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簡介：一枚生命科學(xué)行業(yè)技術(shù)控~ 共同學(xué)習(xí)，歡迎指正補(bǔ)充，感謝支持回帖~ 細(xì)胞破碎技術(shù)的定義¬——細(xì)胞破碎技術(shù)是指利用外力破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來的技術(shù)，是分離純化細(xì)胞內(nèi)容合成的非分泌型生化 物質(zhì)（產(chǎn)品）的基礎(chǔ)。結(jié)合重組DNA技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù)上的重大進(jìn)展，以前認(rèn)為很難獲得的蛋白質(zhì)現(xiàn)在可以大規(guī)模生產(chǎn)。 在生物學(xué)研究中，除了某些細(xì)胞外的多肽激素和某些蛋白質(zhì)與酶以外，經(jīng)常會對細(xì)胞或組織進(jìn)行破碎處理，使生物大分子充分釋放到溶液中，并不丟失生物活性，最終目的是獲得細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)。不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織，其細(xì)胞破碎的難易不一，使用的方法也不相同，如動物臟器的細(xì)胞膜較脆弱，容易破碎，植物和微生物由于具有較堅(jiān)固的纖維素、半纖維素組成的細(xì)胞壁，要采取專門的細(xì)胞破碎方法。 由于細(xì)菌、酵母、真菌、植物都有細(xì)胞壁，但成分不同，且同類細(xì)胞結(jié)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)不同，因此其細(xì)胞壁的堅(jiān)固程度不同，總體呈現(xiàn)遞增態(tài)勢。動物細(xì)胞雖然沒有細(xì)胞壁，但具有細(xì)胞膜，也需要一定的細(xì)胞破碎方法來破膜，達(dá)到提取產(chǎn)物的目的。 NO.1 滲透沖擊破碎法 一種較為溫和的破碎方法，將細(xì)胞放在高滲透壓的溶液中（如一定濃度的甘油或蔗糖溶液），由于滲透壓的作用，細(xì)胞內(nèi)水分便向外滲透，細(xì)胞發(fā)生收縮，當(dāng)達(dá)到平衡后，將介質(zhì)快速稀釋，或?qū)⒓?xì)胞轉(zhuǎn)入水或緩沖液中，由于滲透壓的突然變化，胞外的水迅速滲入胞內(nèi)，引起細(xì)胞快速膨脹而破裂。 NO.2 反復(fù)凍融法 將細(xì)胞放在低溫下冷凍（約-15℃），然后在室溫中融化，反復(fù)多次而達(dá)到破壁作用。由于冷凍，一方面能使細(xì)胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂，從而增加細(xì)胞的親水性能，另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶，形成冰晶粒，引起細(xì)胞膨脹破裂。對于細(xì)胞壁較脆弱的菌體，可采用此法。 NO.3 酶溶液破碎法 利用各種水解酶，如溶菌酶等，將細(xì)胞壁分解，使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來。此法適合多種微生物。 NO.4 化學(xué)試劑法 某些有機(jī)溶劑（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑等化學(xué)藥品都可以改變細(xì)胞壁或膜的通透性從而使內(nèi)含物有選擇的滲透出來。有些動物細(xì)胞，例如腫瘤細(xì)胞可采用十二烷基磺酸鈉（SDS）、去氧膽酸鈉等細(xì)胞膜破壞。 互動回帖吧 在對細(xì)胞破碎的學(xué)習(xí)、研究過程中，你還遇到其他哪些問題和感悟呢？歡迎回帖分享，共同學(xué)習(xí)，共同進(jìn)步。 |
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6樓2022-07-11 10:09:07
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破碎的話，樣品反復(fù)凍溶、化學(xué)試劑和酶溶液都可以用，就是殘留比較麻煩，后期純化比較費(fèi)事，得率不太穩(wěn)定，不知道蟲友或樓主有什么可以推薦 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2021-03-10 09:12:34
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4樓2021-03-11 07:03:40
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