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sweet5210新蟲 (初入文壇)
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相對(duì)定量還是絕對(duì)定量分不清楚，跪求問(wèn)題，重賞！��！ 已有2人參與
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跪求請(qǐng)問(wèn)這段話描述的到底是相對(duì)定量pcr還是絕對(duì)定量pcr，在網(wǎng)上查了很多資料說(shuō)相對(duì)的不需要標(biāo)曲，想像他一樣獲得細(xì)胞中mRNA的含量完全不知道什么意思，不做這個(gè)相關(guān)的，只想要這一小部分?jǐn)?shù)據(jù)，跪求回答，快畢業(yè)了好頭疼。 “通過(guò)測(cè)定 control RNA(在 Revert Aid First Strand c DNA合成試劑盒的人GAPDH m RNA)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將Ct 值轉(zhuǎn)化成絕對(duì)GAPDH 拷貝數(shù)。 標(biāo)準(zhǔn)曲線通過(guò)配制不同濃度的control RNA通過(guò)同樣條件的逆轉(zhuǎn)錄和 q PCR定量得到。每個(gè)濃度均重復(fù)測(cè)定三次。通過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞個(gè)數(shù)，得到細(xì)胞內(nèi)平均的 GAPDH的拷貝數(shù)。細(xì)胞內(nèi)的mRNA ACTB 和 TK1 參照 GAPDH 表達(dá)量，通過(guò) 2–ΔΔCt方法計(jì)算得到” |
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相對(duì)定量因?yàn)闆](méi)有做標(biāo)準(zhǔn)曲線，細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)量mRNA ACTB 和 TK1 只能相互比較。在相對(duì)定量中，要么以ACTB的表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)（一般默認(rèn)為1），TK1相對(duì)于ACTB的表達(dá)量為多少，要么以TK1的表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)，ACTB的表達(dá)量為多少。 絕對(duì)定量因?yàn)橛袠?biāo)準(zhǔn)曲線，mRNA ACTB 和 TK1 都可以通過(guò)比較標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出表達(dá)量。即以標(biāo)準(zhǔn)曲線的表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)，mRNA ACTB 和 TK1 的表達(dá)量為多少。 |
4樓2021-02-27 15:37:46
yuehedou
木蟲 (小有名氣)
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2樓2021-02-25 15:43:29
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3樓2021-02-26 17:48:41
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