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| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題,作者sweet5210將贈(zèng)送您 15 個(gè)金幣 | ||
sweet5210新蟲(chóng) (初入文壇)
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相對(duì)定量還是絕對(duì)定量分不清楚,跪求問(wèn)題,重賞!! 已有2人參與
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跪求請(qǐng)問(wèn)這段話描述的到底是相對(duì)定量pcr還是絕對(duì)定量pcr,在網(wǎng)上查了很多資料說(shuō)相對(duì)的不需要標(biāo)曲,想像他一樣獲得細(xì)胞中mRNA的含量完全不知道什么意思,不做這個(gè)相關(guān)的,只想要這一小部分?jǐn)?shù)據(jù),跪求回答,快畢業(yè)了好頭疼。 “通過(guò)測(cè)定 control RNA(在 Revert Aid First Strand c DNA合成試劑盒的人GAPDH m RNA)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,將Ct 值轉(zhuǎn)化成絕對(duì)GAPDH 拷貝數(shù)。 標(biāo)準(zhǔn)曲線通過(guò)配制不同濃度的control RNA通過(guò)同樣條件的逆轉(zhuǎn)錄和 q PCR定量得到。每個(gè)濃度均重復(fù)測(cè)定三次。通過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞個(gè)數(shù),得到細(xì)胞內(nèi)平均的 GAPDH的拷貝數(shù)。細(xì)胞內(nèi)的mRNA ACTB 和 TK1 參照 GAPDH 表達(dá)量,通過(guò) 2–ΔΔCt方法計(jì)算得到” |

木蟲(chóng) (小有名氣)

至尊木蟲(chóng) (知名作家)
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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相對(duì)定量因?yàn)闆](méi)有做標(biāo)準(zhǔn)曲線,細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)量mRNA ACTB 和 TK1 只能相互比較。在相對(duì)定量中,要么以ACTB的表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)(一般默認(rèn)為1),TK1相對(duì)于ACTB的表達(dá)量為多少,要么以TK1的表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn),ACTB的表達(dá)量為多少。 絕對(duì)定量因?yàn)橛袠?biāo)準(zhǔn)曲線,mRNA ACTB 和 TK1 都可以通過(guò)比較標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出表達(dá)量。即以標(biāo)準(zhǔn)曲線的表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn),mRNA ACTB 和 TK1 的表達(dá)量為多少。 |

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