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lostunit新蟲 (小有名氣)
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表達(dá)的蛋白質(zhì)用tev酶切割后，目標(biāo)蛋白無法與原蛋白分離
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我的蛋白在表達(dá)后需要用tev酶切除His標(biāo)簽，可是切完后總是切不完，而且切下來的目標(biāo)蛋白好像會和原蛋白有相互作用，無法再用Ni-NTA分離(切下來的目標(biāo)蛋白已經(jīng)沒有了his標(biāo)簽，卻無法從鎳柱上洗脫下來，之后用凝膠層析也無法將原蛋白和切下來的蛋白分離，SDSPAGE顯示兩種蛋白在同一個峰里)。 現(xiàn)在我考慮的是兩種方法: 1. 提高tev酶的活性，將原蛋白盡量全部酶切，只剩下目標(biāo)蛋白和切下來的his標(biāo)簽，這樣就能分離出目標(biāo)蛋白。但嘗試很多條件都無法達(dá)到，總是剩下大概一半的蛋白切不動。 2. 添加一些試劑破壞原蛋白和目標(biāo)蛋白的相互作用。我的蛋白里有很多二硫鍵，所以試過GSH和GSSG，但沒有用。 大家有沒有什么好方法呢？ @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan @biostar2009 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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lostunit
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