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[交流]
HRP高碘酸鈉法標記中各組分的作用是什么?
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HRP標記主要采用高碘酸鈉法,HRP的活化過程如下: ①. 稱取HRP酶適量,用純水配置為5mg/ml的HRP液體; 注:當HRP從-20℃取出后,一定要平衡到室溫,否則HRP凍干品易潮解。稱量時不要用稱量紙,不要用工具取HRP,應(yīng)將HRP直接小心地倒入要用來溶解HRP的器具中。在倒HRP時,不要在風口(如電風扇風,自然風,呼吸)操作,因為HRP凍干品質(zhì)輕易飛揚;盡量不要說話,以防污染。HRP盡量不要回倒,以防污染。當HRP量小于10 mg時,溶解器具可用干凈Eppendoff tube,HRP量大于10 mg時,則要求用體積稍大的小玻璃瓶。 ②. 用新鮮配制的0.1M NaIO4溶液,按每mg HRP酶加入34μl,避光放置4℃放置1hrs; ③. 按每mg HRP酶加入25μl的量加入乙二醇,避光放置4℃,30分鐘; ④. 裝入透析袋中,用1mM醋酸緩沖液(pH4.0~4.4)透析過夜,期間至少換液2次,均要求避光。 目前搞不懂的主要是: 1、HRP活化后為什么需要用pH4.4的乙酸鈉緩沖透析?這一步的作用是什么? 2、HRP活化時加入乙二醇的作用是什么? 希望有高手能解惑。 |
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