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snoopyzxx木蟲 (著名寫手)
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[交流]
HRP高碘酸鈉法標(biāo)記中各組分的作用是什么？
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HRP標(biāo)記主要采用高碘酸鈉法，HRP的活化過程如下： ①. 稱取HRP酶適量，用純水配置為5mg/ml的HRP液體； 注：當(dāng)HRP從-20℃取出后，一定要平衡到室溫，否則HRP凍干品易潮解。稱量時(shí)不要用稱量紙，不要用工具取HRP，應(yīng)將HRP直接小心地倒入要用來溶解HRP的器具中。在倒HRP時(shí)，不要在風(fēng)口（如電風(fēng)扇風(fēng)，自然風(fēng)，呼吸）操作，因?yàn)镠RP凍干品質(zhì)輕易飛揚(yáng)；盡量不要說話，以防污染。HRP盡量不要回倒，以防污染。當(dāng)HRP量小于10 mg時(shí)，溶解器具可用干凈Eppendoff tube，HRP量大于10 mg時(shí)，則要求用體積稍大的小玻璃瓶。 ②. 用新鮮配制的0.1M NaIO4溶液，按每mg HRP酶加入34μl，避光放置4℃放置1hrs； ③. 按每mg HRP酶加入25μl的量加入乙二醇，避光放置4℃，30分鐘； ④. 裝入透析袋中，用1mM醋酸緩沖液（pH4.0~4.4）透析過夜，期間至少換液2次，均要求避光。 目前搞不懂的主要是： 1、HRP活化后為什么需要用pH4.4的乙酸鈉緩沖透析？這一步的作用是什么？ 2、HRP活化時(shí)加入乙二醇的作用是什么？ 希望有高手能解惑。 |
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簡單回復(fù)
2020-12-28 18:54
回復(fù)
snoopyzxx(金幣+1): 謝謝參與
2020-12-30 16:53
回復(fù)
snoopyzxx(金幣+1): 謝謝參與
8
2020-12-31 16:53
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snoopyzxx(金幣+1): 謝謝參與
1
2021-01-03 17:34
回復(fù)
snoopyzxx(金幣+1): 謝謝參與
1
nono20096樓
2021-01-03 20:40
回復(fù)
snoopyzxx(金幣+1): 謝謝參與
·
2021-01-04 14:45
回復(fù)
snoopyzxx(金幣+1): 謝謝參與
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