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快樂化學(xué)人銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
真誠求問：請問DNA加合物相對定量色譜質(zhì)譜上具體怎么計算？ 已有1人參與
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真誠求問各位大佬， DNA加合物定量方面的問題... 目前知道的有絕對定量和相對定量兩種方式。 絕對定量目前流行的方式是穩(wěn)定同位素稀釋法，即通過已知濃度的同位素內(nèi)標標樣去定復(fù)雜基質(zhì)中的加合物的絕對含量（其實具體的計算方法也是很懵圈） 相對定量有兩種說法，一是算，UV-Vis先測DNA的含量，然后計算大概有多少個正常核苷酸，然后通過外標法或者內(nèi)標法吧，計算百分比；二是說用LC-MS/MS直接測核苷的響應(yīng)，算出百分比.....（是否是這樣也不清楚...） 小妹真的對這塊真的十分懵圈，實在是找不到同門問，畢業(yè)在即，痛苦萬分。 而且目前很大的困難是標樣不全，要檢測4種加合物并且算它們之間的比值，目前只有2種標樣，想了各種方法實在是能力有限；更別提同位素標樣，完全沒有；化合物本身毒性很大，再去標樣合成幾乎沒戲...... 相對定量是說 我有核苷標準品，然后稱重溶解算濃度，逐級稀釋，用和待測加合物同樣的色譜方法，找母子離子，優(yōu)化它的MRM峰形保留時間，然后做它的工作曲線，然后之后再做實驗的時候，水解DNA成核苷，上質(zhì)譜看響應(yīng)，通過工作曲線算出正常核苷的濃度嗎？一般來說都是說XX個加合物/xx個正常核苷，這個 個是怎么算出來的？ 難道是通過阿佛加德羅常數(shù)嗎... 這樣豈不是誤差非常大？ 以及方法學(xué)考察部分，標樣不全，能做多少呢？還有可信度嗎？碩士畢業(yè)論文根本實驗都做不全，沒法畢業(yè)也沒法出文章阿。 十分煎熬！ 希望有一步步的類似于protocol的教導(dǎo)，萬分感謝！ |
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4樓2020-12-03 11:11:25
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