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快樂(lè)化學(xué)人銅蟲 (初入文壇)
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真誠(chéng)求問(wèn)：請(qǐng)問(wèn)DNA加合物相對(duì)定量色譜質(zhì)譜上具體怎么計(jì)算？ 已有1人參與
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真誠(chéng)求問(wèn)各位大佬， DNA加合物定量方面的問(wèn)題... 目前知道的有絕對(duì)定量和相對(duì)定量?jī)煞N方式。 絕對(duì)定量目前流行的方式是穩(wěn)定同位素稀釋法，即通過(guò)已知濃度的同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)樣去定復(fù)雜基質(zhì)中的加合物的絕對(duì)含量（其實(shí)具體的計(jì)算方法也是很懵圈） 相對(duì)定量有兩種說(shuō)法，一是算，UV-Vis先測(cè)DNA的含量，然后計(jì)算大概有多少個(gè)正常核苷酸，然后通過(guò)外標(biāo)法或者內(nèi)標(biāo)法吧，計(jì)算百分比；二是說(shuō)用LC-MS/MS直接測(cè)核苷的響應(yīng)，算出百分比.....（是否是這樣也不清楚...） 小妹真的對(duì)這塊真的十分懵圈，實(shí)在是找不到同門問(wèn)，畢業(yè)在即，痛苦萬(wàn)分。 而且目前很大的困難是標(biāo)樣不全，要檢測(cè)4種加合物并且算它們之間的比值，目前只有2種標(biāo)樣，想了各種方法實(shí)在是能力有限；更別提同位素標(biāo)樣，完全沒有；化合物本身毒性很大，再去標(biāo)樣合成幾乎沒戲...... 相對(duì)定量是說(shuō) 我有核苷標(biāo)準(zhǔn)品，然后稱重溶解算濃度，逐級(jí)稀釋，用和待測(cè)加合物同樣的色譜方法，找母子離子，優(yōu)化它的MRM峰形保留時(shí)間，然后做它的工作曲線，然后之后再做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，水解DNA成核苷，上質(zhì)譜看響應(yīng)，通過(guò)工作曲線算出正常核苷的濃度嗎？一般來(lái)說(shuō)都是說(shuō)XX個(gè)加合物/xx個(gè)正常核苷，這個(gè) 個(gè)是怎么算出來(lái)的？ 難道是通過(guò)阿佛加德羅常數(shù)嗎... 這樣豈不是誤差非常大？ 以及方法學(xué)考察部分，標(biāo)樣不全，能做多少呢？還有可信度嗎？碩士畢業(yè)論文根本實(shí)驗(yàn)都做不全，沒法畢業(yè)也沒法出文章阿。 十分煎熬！ 希望有一步步的類似于protocol的教導(dǎo)，萬(wàn)分感謝！ |
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2樓2020-12-02 08:40:34
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3樓2020-12-02 08:50:47
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4樓2020-12-03 11:11:25
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