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absinbio
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IHC、ELISA和WB區(qū)別 已有1人參與
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免疫學(xué)三大工具，IHC、Western blot、ELISA，分別用于定位，定性和定量! IHC（免疫組化） 是融合了免疫學(xué)原理（抗原抗體特異性結(jié)合）和組織學(xué)技術(shù)（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色，來(lái)對(duì)組織（細(xì)胞）內(nèi)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細(xì)胞或組織，要在顯微鏡下觀察結(jié)果，可能出現(xiàn)膜陽(yáng)性、質(zhì)陽(yáng)性和核陽(yáng)性。 ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)） 用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色，待測(cè)的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒(méi)有用到組織包埋、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上開(kāi)始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，從而使后來(lái)形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。 免疫組化和elisa所用到的原理大致相同，只是因?yàn)樗鶛z測(cè)的樣品不同，從而在操作方法上有所不同。elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高。 Western bolt （蛋白質(zhì)印跡法） 先要進(jìn)行SDS-PAGE，然后將分離開(kāi)的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來(lái)檢測(cè)樣品，可以用于定性和半定量。 【1】.對(duì)于IHC來(lái)說(shuō)，定位是免疫組化最大的優(yōu)勢(shì) 該方法可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位, 因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，相比于其他蛋白檢測(cè)方法，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高，是定位檢測(cè)分析首選方法對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開(kāi)展深入研究是十分有意義，尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。 【2】WB與IHC技術(shù)相比，定量可能更加準(zhǔn)確 當(dāng)然WB也可定性和定位(通過(guò)提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測(cè)其中抗原含量，進(jìn)而間接反映它們的定位)，但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于IHC。 【3】ELISA與IHC相比，定量最準(zhǔn)確，是分泌性蛋白檢測(cè)首選方法之一。 尤其對(duì)于微定量分析多個(gè)樣本非常有用，所用試劑和樣品量很少，結(jié)果精確。IHC針對(duì)性比較強(qiáng)，而且一般是以組織或者細(xì)胞為樣本，而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液。免疫組化可以快速檢測(cè)樣本中抗體的陽(yáng)性或者陰性，一般不用于定量檢測(cè)。 【4】WB和ELISA的區(qū)別 western blotting：可以看到特異性的條帶，但是定量比較煩 ELISA：可以直接讀出濃度，但是如果抗體有非特異性結(jié)合，那得到的數(shù)值就不可信。 WB：只能半定量,但是可以檢測(cè)細(xì)胞膜蛋白,這點(diǎn)elisa做不到 ELISA：可用定量方法檢測(cè)蛋白,也就是說(shuō)可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響 WB：所檢測(cè)的一般是抗原，而elisa抗原抗體都可以檢測(cè)。 WB：所檢測(cè)的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚體、降解產(chǎn)物等，一句話，WB可以確定所用抗體是與哪種蛋白起作用的；而elisa無(wú)能為力，一鍋端了。 WB：所適用的一抗一般是線性位點(diǎn)的，elisa線性或構(gòu)象型抗體都可以使用。從另一個(gè)意義上講，WB可以做抗體是線性位點(diǎn)還是構(gòu)象型位點(diǎn)的補(bǔ)充判定，而elisa不行。 WB：一次處理量就是一塊膠版，10-20個(gè)樣品最多了。elisa一塊96孔板一次可以處理96個(gè)樣本，可以設(shè)置多個(gè)復(fù)孔、對(duì)照、梯度樣等來(lái)提高檢測(cè)的可信度。 WB：操作常見(jiàn)的非特異性條帶，膜本底差，顯色不好等等缺點(diǎn)在elisa上表現(xiàn)得要好得多。 |
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2樓2020-08-14 08:46:56
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