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1437521148新蟲 (初入文壇)
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[交流]
蛋白純化 已有2人參與
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請問 有沒有人知道 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品如何去摸索純化條件呢?如果用標(biāo)準(zhǔn)品去過柱子 接收到的液體用什么方法確定哪個點的洗脫效果是最好的呢 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
銅蟲 (小有名氣)
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糾正一個問題,蛋白標(biāo)準(zhǔn)品就是些分子量大小已知的蛋白混合物,簡單說就是用來標(biāo)定對應(yīng)的柱子的,換句話說就是標(biāo)定分子量多少的蛋白應(yīng)該在什么位置出峰,因為柱子使用久了,柱效會發(fā)生一定的變化,如蛋白A用新柱子是在20ml出峰,但是時間久了之后,可能就會在30ml出峰,這時候你就無法從出峰位置直觀判定該蛋白是否正確了,需要跑膠看一下。 純化條件的話建議你去GE官網(wǎng)上下載gel filtration的handbook,里面有推薦的buffer,一般就是50mM磷酸鹽緩沖液,加上低鹽 150mM 以下的NaCl,pH7.2 , 但是具體的鹽濃度和pH要根據(jù)目的蛋白進(jìn)行調(diào)整 |

新蟲 (初入文壇)
銅蟲 (小有名氣)

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