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1437521148新蟲 (初入文壇)
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[交流]
蛋白純化 已有2人參與
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請問 有沒有人知道 蛋白標準品如何去摸索純化條件呢？如果用標準品去過柱子 接收到的液體用什么方法確定哪個點的洗脫效果是最好的呢 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2020-03-12 13:53:33
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糾正一個問題，蛋白標準品就是些分子量大小已知的蛋白混合物，簡單說就是用來標定對應(yīng)的柱子的，換句話說就是標定分子量多少的蛋白應(yīng)該在什么位置出峰，因為柱子使用久了，柱效會發(fā)生一定的變化，如蛋白A用新柱子是在20ml出峰，但是時間久了之后，可能就會在30ml出峰，這時候你就無法從出峰位置直觀判定該蛋白是否正確了，需要跑膠看一下。 純化條件的話建議你去GE官網(wǎng)上下載gel filtration的handbook，里面有推薦的buffer，一般就是50mM磷酸鹽緩沖液，加上低鹽 150mM 以下的NaCl，pH7.2 ， 但是具體的鹽濃度和pH要根據(jù)目的蛋白進行調(diào)整 |
3樓2020-03-13 14:08:37
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銅蟲 (小有名氣)
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4樓2020-03-13 14:11:26
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